半夏无菌组织培养体系建立中存在的问题和解决方法.pdfVIP

安徽农业科学，Jollrnal of Anhlli Agri. Sci. 2015 ,43( 17) :82 -83 责任编辑黄小燕责任校对李岩 半夏无菌组织培养体系建立中存在的问题和解决方法 张利霞，孟彦斌 (陇南师范高等专科学校农林技术学院，甘肃陇南向25∞) 摘要 分析了建立半夏纽培体系过程中存在的污染、次生代谢产物毒害、低成活率、再生方式多样化的问题，提出了切实可行的解决方 法，为对高效建立半夏组织培养体系的实践提供依据。 关键词 半夏;组织培养体系;建立;问题;解决方法 中图分类号 S5日.23 +9 文献标识码 A 文章编号 0517 -6611(2015)17 -082-02 半夏组织培养技术主要用于大规模繁殖半夏优良品种 再剥去皮，用 10% 的次氯酸铀榕液消毒30 min。材料消毒和 和珍贵种质资源，茎尖脱毒和无毒苗扩繁以及人工半夏种子 冲洗的过程中要不断搅拌材料，使药剂或水和材料充分接 生产中，其首要环节是建立无菌组织培养体系。建立半夏无 触。外植体材料消毒结束后，将其保留在消毒的容器中，瓶 菌组织培养体系，就要解决污染、次生代谢产物毒害、成活率 口对着酒精灯火焰的情况下对材料进行切割、接种。 1. 2.3 分散培养。用试管分装培养基，灭菌后，每支试管中 低、再生方式多样化的问题，笔者在此就这几种问题的发生 接一个材料进行培养，5 -15 d 内将无污染的材料转接在诱 情况及解决方法进行了分析。 1 污染及其预防措施 导培养基中，可避免多个材料接在一个培养瓶中造成的交叉 感染和浪费。也可在每试管中接一粒消毒后的块茎或珠芽， 污染可导致组织培养体系建立工作失败，且引起污染的 因素复杂多样，所以半夏组织培养无菌体系建立中最为关键 培养一段时期后，剪取无污染材料的叶柄和叶片抨插组培。 1. 2.4 应用农药或抗生素抑制病原菌。组培体系建立过程 和困难的问题是防止污染发生。 1. 1 污染原因 在组培半夏外植体建立中，引起污染的一 中任何环节操作不慎就带来污染，且外植体材料所带内生菌 用前述的表面消毒方法难以杀灭，半夏块茎和叶也不耐多次 类因素是外植体、消毒用容器、培养基、接种器械和接种室消 消毒，为此可以参考其他植物组培的相关研究成果，用抗生 毒不彻底，超净工作台过谑装置失效，操作人员未遵守操作 素或农药预处理外植体，然后进行常规消毒，或将抗生素或 规程等，使得培养材料外部或培养基上带有细菌、真菌等微 次氯酸铀加入培养基中。彭广霖等用含5 -10 mgIL 次氯酸 生物，在培养最初的几天内培养材料和培养基上滋生菌丝或 俐的培养基很好地抑制了组培中的枯草杆菌[1] 。抗生素有 菌落，不及时处理会使所有材料和整个培养基表面均受到感 利福平、氨韦西林纳、庆大霉素、链霉素等，在不同的植物组 染。引起污染的另一因素是外植体携带内生菌，培养初期并 培上用量在5 -1 删mglL 不等[2 -4] 。这些都值得借鉴，但 不表现污染，培养5 d 后或更长时间才出现，污染程度较轻， 在半夏组织培养中需要先进行试验才能确定药剂类型和