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- 2017-10-13 发布于浙江
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分子生物学与细胞生的物学实验基本技术
分子生物学与细胞生物学实验基本技术
2005-02
实验一 组织块培养法
一、目的
学习原代培养方法,从供体取得组织细胞后在体外进行的首次培养。
二、概述
组织块培养法是常用的、简便易行和成功率较高的原代培养方法。可以采用剪切法,即将组织块剪切成小块后,接种于培养瓶,组织小块贴壁24h或更长时间后,细胞就从组织四周游出。但由于在反复剪切和接种过程中对组织块的损伤,并不是每个小块都能长出细胞。用于组织块培养的培养瓶可根据不同细胞生长的需要作适当处理,如预先涂以胶原薄层,以利于上皮样细胞等的生长。(本节以新生牛主动脉平滑肌培养为例)
三、材料
仪器
净化工作台
恒温水浴箱
冰箱(4℃、-20℃)
倒置相差显微镜
培养箱
玻璃器皿
培养皿(Φ100mm)
吸管(弯头)
烧杯(500ml、200ml、10ml)
广口试剂瓶(500ml)
玻璃瓶(250ml、100ml)
培养瓶
废液缸
塑料器皿
吸头
枪头
胶塞
EP管
其他物品
微量加样枪
眼科组织剪(直尖、弯)
眼科组织镊(直、弯)
12.5cm组织镊(无钩、1×2钩)
25cm敷料镊(无钩)
止血钳(18cm直纹式、12.5cm直纹式、弯纹式)
解剖剪
试剂
D-Hanks液
小牛血清
RPMI1640
双抗(青霉素、链霉素)
1N HCl
7.4%NaHCO3
四、操作步骤
取材:打开胸腔,无菌操作下取出主动脉胸段,浸到预先配
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