吴乃虎—基因工程原理.docVIP

目录 基因与基因工程 基因研究的发展 基因的现代概念 基因工程的诞生及其主要的研究内容 基因操作的主要技术原理 核酸的凝胶电泳 核酸分子杂交 细菌转化 肺炎球菌的转化 大肠杆菌的转化 细菌转化频率 DNA核苷酸序列分析 基因的化学合成 基因定点突变 基因扩增 研究DNA与蛋白质相互作用的方法 基因克隆的酶学基础 核酸内切限制酶与DNA分子的体外切割 寄主控制的限制与修饰现象 核酸内切限制酶的类型 I 型和III型核酸内切限制酶的基本特性 II型核酸内切限制酶的基本特性 基本特性 同裂酶 同尾酶 限制片段末端的连接作用 核酸内切限制酶的命名法 影响核酸内切限制酶活性的因素 DNA的纯度 DNA的甲基化程度 酶切消化反应的温度 DNA分子的结构 核酸内切限制酶的缓冲液 核酸内切限制酶对DNA的消化作用 核酸内切限制酶与靶DNA识别序列的结合模式 核酸内切限制酶对DNA分子的局部消化作用 核酸内切限制酶对真核基因组DNA的消化作用 DNA连接酶与DNA分子的体外连接 DNA连接酶 粘性末端DNA片段的连接 平末端DNA片段的连接 同聚物加尾法 衔接物连接法 DNA接头连接法 热稳定的DNA连接酶 寡核苷酸连接测定法 连接酶链式反应(LCR) DNA聚合酶 DNA聚合酶I与核酸杂交探针的制备 DNA聚合酶I DNA缺口转移 DNA杂交探针的制备 大肠杆菌DNA聚合酶I 的Klenow片段与DNA末端标记 T4 DNA聚合酶和取代合成法标记DNA片段 依赖于RNA的DNA聚合酶与互补DNA的合成 T7 DNA聚合酶 修饰的T7 DNA聚合酶 DNA及RNA的修饰酶 末端脱氧核苷酸转移酶与同聚物加尾 T4多核苷酸激酶与DNA分子5’-末端的标记 碱性磷酸酶与DNA脱磷酸作用 核酸外切酶 核酸外切酶 VII (exo VII) 核酸外切酶 III (exo III) ?核酸外切酶 (?? exo)和T7基因6核酸外切酶 单链核酸内切酶 S1核酸酶与RNA分子定位 Bal1 核酸酶与限制位点的确定 基因克隆的质粒载体 质粒的一般生物学特性 质粒DNA 质粒DNA编码的表型 质粒DNA的转移 质粒的类型 F质粒 质粒DNA的接合作用 质粒DNA的迁移作用 质粒DNA的复制类型 质粒DNA的不亲和性 质粒的不亲和性现象 质粒不亲和性的分子基础 质粒DNA的复制与拷贝数的控制 质粒DNA复制的多样性 ColE 1质粒DNA复制的启动 质粒DNA拷贝数的控制 天然质粒拷贝数的控制 杂种质粒拷贝数的控制 质粒复制控制的分子模型 抑制蛋白质稀释模型 自体阻遏蛋白质模型 质粒DNA的分离与纯化 氯化铯密度梯度离心 碱变性法 微量碱变性法 影响质粒DNA产量的因素 寄主菌株的遗传背景 质粒的拷贝数与分子大小 质粒载体的构建与类型 天然质粒用作克隆载体的局限性 质粒载体必须具备的基本条件 质粒载体的选择记号 高拷贝数的质粒载体 低拷贝数的质粒载体 失控的质粒载体 插入失活型的质粒载体 正选择的质粒载体 表达型的质粒载体 重要的大肠杆菌质粒载体 pSC101 质粒载体 应用pSC101 质粒作基因克隆载体的实例一---葡萄球菌质粒基因在大肠杆菌中的表达 应用pSC101 质粒作基因克隆载体的实例二---在大肠杆菌中克隆非洲爪蟾 Col 1质粒载体 pBR322质粒载体 pBR322质粒载体的构建 pBR322质粒载体的优点 pBR322质粒载体的改良 应用pBR322质粒作为基因克隆载体的实例---水稻夜绿体光诱导基因psbA的结构分析 pUC 质粒载体 pUC 质粒载体的结构 pUC 质粒载体的优点 其他重要的质粒载体 丧失迁移功能的的质粒载体 能在体外转录克隆基因的质粒载体 穿梭质粒载体 质粒载体的稳定性问题 质粒载体不稳定性的类型 结构的不稳定性 分离的不稳定性 影响质粒载体稳定性的主要因素 新陈代谢负荷对质粒载体稳定性的效应 拷贝数差度对质粒载体稳定性的影响 寄主重组体系对质粒载体稳定性的效应 随机分配的分子机理 通过精巧的控制环路使质粒拷贝数的差度限制在最低的水平 通过位点特异的重组作用消除天然质粒的寡聚体 通过调节细胞的分裂活动阻止无质粒细胞的产生 大肠杆菌素的合成增进了质粒的稳定性 主动分配的分子机理 分配区的结构与功能 预配对模型 二聚体的解离有助于质粒的主动分配 寄主致死功能对质粒稳定性的效应 噬菌体载体和柯斯载体 噬菌体的一般生物学特性 ?噬菌体载体 柯斯质粒载体 单链DNA噬菌体载体 噬菌体载体 基因的分离与鉴定 DNA克隆片段的产生与分离 基因组DNA克隆片段的产生与分离 DNA片段的大小分部 编码目的基因的克隆片段的富集 重组体DNA分子的构建及导入受体细胞 外源DNA片段同载体分子的重组 外源DNA片段定