BRCA1甲基化在卵巢癌发病和化疗敏感性中的作用和机制研究.pdfVIP

王炎秋 上海交通大学博士后出站报告 摘要 BRCAI甲基化在卵巢癌发病及化疗敏感性中的 作用及机制研究 中文摘要 卵巢恶性肿瘤是女性生殖系统三大恶性肿瘤之一，其中90％是上皮性卵巢 癌，在妇科肿瘤中致死率最高。主要原因是缺乏早期诊断手段及产生化疗耐药。 DNA甲基化作为表观遗传的主要方式之一，其异常与肿瘤发生及化疗耐药之间 的关系已倍受关注。BRCAl为乳腺癌．卵巢癌易感基因1，其突变与50％90％的 遗传性卵巢癌的发病和化疗效果相关；而临床上90％95％的卵巢癌为散发性， 在散发性的卵巢癌，其基因突变率仅为㈣．1％，因此，BRCAl甲基化可能在卵 time 巢癌发病及化疗耐药中具有重要意义。本研究拟采用Rcal PCR、测序 RT-PCR、MTT、western blm、裸鼠荷瘤模型等技术和方法，研究BRCAl甲基化 在卵巢癌早期诊断及化疗敏感性中的作用。 第一部分，探讨卵巢癌中BRCAl甲基化状态与卵巢癌发生的相关性。方法： ReMtime PCR和测序法检测卵巢癌组织、细胞系及血浆中BRcAl甲基化水平， 分析BRCAl甲基化水平与与临床病理联系，及在卵巢癌早期诊断中的价值；Real time PCR及westernblm检测BRCAl的表达水平：体内荷瘤试验验证。结果： 卵巢癌组织和细胞系中的BRCAl甲基化水平高于正常卵巢组织／细胞，且随着病 理分期的升高而显著增加；卵巢癌I期和II期卵巢癌患者的BRCAl甲基化水平 无差异。卵巢癌Ⅱ、Ⅲ期患者血清中BRCAl的甲基化水平高于正常人及良性卵 巢肿瘤患者，其中IⅡ期患者血清BRCAl甲基化水平明显高于I和II患者，而I 患者与健康人、卵巢良性肿瘤患者BRCAl甲基化水平无明显差异。去甲基化处 理使荷瘤裸鼠的肿瘤体积明显缩小。结论：卵巢癌中BRCAl低表达与BRCAl 高甲基化状态有关，但血清BRCAl甲基化水平尚不能作为早期诊断标志物。 第二部分，探讨卵巢癌BRCAl甲基化状态与卵巢癌顺铂敏感性的关系及对 荷瘤裸鼠化疗效果的影响。方法：通过检测BRCAl在卵巢癌耐药及其亲本细胞， 分析BRCAl甲基化与化疗耐药的关系。建立不同的裸鼠卵巢癌腹腔化疗模型， 比较甲基化和去甲基化处理对裸鼠化疗效果的影响。结果：卵巢癌DDP敏感细 胞甲基化水平明显高于耐药细胞，去甲基化处理使卵巢癌细胞对DDP敏感性降 王炎秋 上海交通大学博士后出站报告 摘要 低。结论：BRCAl高甲基化与卵巢癌化疗敏感性相关。 第三部分，BRCAl甲基化可能参与的信号通路。方法：Western blotting检 Damage通 果：卵巢癌细胞中存在AKT蛋白和P．Akt的表达，但细胞间表达水平无明显差 信号通路，在卵巢癌发生及化疗敏感性中发挥重要作用。 【关键词】BRCAl；DNA甲基化；早期诊断；化疗耐药；卵巢癌 2 王炎秋 上海交通大学博士后出站报告 摘要 ROLESOFABERRANT METHYLATIONOFBRCAlINTHE MORBIDITY ANDCHEMOSENSITIVITYIN HUMAN OVARIANCANCER ABSTRACTS ovaria