BubR1基因在肝癌细胞中的表达和其SiRNA转染体的构建.pdfVIP

摘要 摘要 目的： 研究BubRl在乙肝病毒阳性及乙肝病毒阴性HCC细胞中的表达差异，明确 BubRl与乙肝病毒阴性HCC细胞相关性，并筛选出BubRl表达最高的乙肝病毒 阳性肝癌细胞。筛选最佳转染条件为后续研究BubRl在体外对HBV阳性HCC 细胞生物学行为的影响以及BubRl与HBX相关性研究提供依据。 方法： 质粒，稳定转染到高表达HBV阳性肝癌细胞筛选沉默效果最佳序列。 结果： 通过RT-PCR技术检测结果显示，BubRl RNA在HBV阳性肝癌细胞中表达 术检测结果显示，BubRl蛋白在HBV阳性肝癌细胞中表达高于HBV阴性肝癌 HBV阳性肝癌细胞中BubRl的mRNA表达和蛋白表达明显降低，其中又以 siRNA．BubRl．3转染组抑制效果最明显。 结论： BubRl在HBV阳性肝癌细胞中表达高于HBV阴性肝癌细胞，其中 病毒阳性肝癌细胞明显存在相关性，筛选出BubRl表达最高的乙肝病毒阳性肝 癌细胞株和转染条件将为进一步研究BubRl在体外对HBV阳性HCC细胞生物 学行为的影响以及BubRl与HBX相关性研究提供依据。 关键词：BubRl、HBV阳性肝癌细胞、HepG2．2．15细胞、转染 II Abstract ABSTRACT Objective： ResearchBubRl differencesinHBV and HCC expression positivenegative andselectsiRNA thatcouldinhibitthe ofBubRl． cells．Design sequences expression ThentransfectthesiRNAinto 5cells TM2000and HepG2．2．1 byLipofectamine researchtheeffectof carcinomacells． hepatoma Methods： the ofPCRandWesterntestBubRl in technology blot Applying expression HBV 1、Huh7) and ivercancercells positive(HepG2、SMMC-772negative themost cellsfor (HepG2．2．15、Hep3B)．Chooserepresentativesubsequent transfectedinto 5 experimentalstudy．DesignedpEGFP-SiBubRlplasmid HepG2．2．1 cells．To theinfluenceof 5cells transfection． detect after HepG2．2．1 Results： RT-PCR detectionresultsshownthat