c-Met及整合素α5β1在贲门癌中的表达及其相关性的研究.pdfVIP

·中文论著摘要· c—Met和整合素Q5pl在贲门癌中的表达 及其相关性的研究 目 的 近年来，贲门癌的发病率呈明显上升趋势。目前的证据表明贲门癌具有其独 特的流行病学趋势、生物学行为和临床特点，表现为病期较晚，侵袭范围广，恶 性程度高，预后不良。这提示贲门癌可能是-koo相对独立的临床疾病，具有其独 特的发病机制。 c．Met是肝细胞生长因子HGF的高亲和性膜受体，其基因定位于染色体7q31， 可识别并结合HGF。c．Met广泛地表达于人体各种正常组织，但在多种肿瘤组织 中呈现出异常的高表达、突变或活性改变。c．Met与胃癌的关系密切，在胃癌细胞 中存在c．Met的表达。胃癌组织中c．Met的过度表达与胃癌进展有关。在胃黏膜 细胞癌变过程中，c．Met癌基因蛋白过量表达出现很早，提示胃黏膜病变细胞处 在高度增殖状态，并具有恶变潜能，故c．Met被认为是与胃癌相关的特异性基因。 但是c．Met基因与贲门癌的关系并不明确，目前并没有研究表明c-Met与贲门癌 的发生发展有明确关系。 整合素是一组细胞表面的黏附分子，是多种基质蛋白的膜受体，其可以参与 细胞的信号传导，调控基因表达、细胞周期和细胞凋亡。肿瘤基因学研究中已证 实整合素与多种癌症的发病、侵袭以及转移相关。在胃癌中，整合素同样出现高 表达，并与胃癌的浸润性、低分化趋向和转移等恶性表型密切相关。 c．Met与整合素都属于肿瘤细胞表面重要的跨膜受体，可独立介导与肿瘤侵袭 和转移有关的信号转导。近年越来越多的研究表明，c．Met与整合素信号系统在肿 瘤细胞表面，下游信号以及两者表达水平上存在精密的相互调控。整合素与c．Met adhersion 之间的相互作用包括直接结合，通过FAP(胞内募集黏附斑，focal plaques)的相互作用，并在表达上有相互影响。对这种交互作用的认识，将有助 于进一步加深对肿瘤侵袭和转移的认识。 为了更加深入地了解贲门癌的分子生物学特征，揭示贲门癌的发病机制，本 研究利用逆转录聚合酶链式反应(ImPCR)，Westernblot和免疫组织化学方法检 测贲门癌组织中c．Met和整合素0【5pl的表达，探讨其与贲门癌临床病理因素的关 系及二者的相关性。 材料与方法 一、实验材料 收集自辽宁省肿瘤医院及辽宁省人民医院2006年10月至1J2007年10月间的贲门 腺癌组织标本45例。取距癌灶5cm以上的正常胃黏膜组织作对照。另收集自辽宁 省肿瘤医院及辽宁省人民医院2004年1月一2007年5月间经手术及病理证实为腺癌 且保存完好的贲门癌组织蜡块102例，同期选取正常胃黏膜组织蜡块36例做对照。 所有患者术前未经化疗或放疗，病灶均为单发。 二、实验方法 1、RT-PCR检测 组织匀浆后以TRIzol试剂提取细胞总RNA，通过逆转录反应将其转化为 为内对照，进行PCR扩增；PCR产物经1．5％琼脂糖凝胶电泳后分析图像，计算目 的基因相对表达量。 2、Western blot检测 组织加入裂解液，匀浆后离心，取上清检测蛋白浓度，并将各样本蛋白浓度 调整一致。每孔加样50p,g，行SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳。电泳后在转印槽中转膜， 夜。次日将膜置于碱性磷酸酶标记的羊抗兔IgG(二抗)中，室温孵育2h，洗膜 2 5minx3次，碱性磷酸酶显色液(AP)显色5min，沥干膜，扫描成像。以Sen image 软件分析图像，计算目的蛋白相对表达量。 3、免疫组织化学方法检Nc．Met禾l整合素仅5p。蛋白的表达情况 SP法检测贲门癌组织蜡块标本102例，同期选取正常胃黏膜组织蜡块36例作对 照。标本蜡块取白病理科，癌灶和癌旁正常组织分别作连续切片，厚49m。兔抗 Cruz公司。 人整合素(t5pl多克隆抗体购自美国Santa