c-Jun氨基末端激酶在大鼠脑缺血再灌注不同时间的表达和相关研究.pdfVIP

㈣攀炒必 c-Jun氨基末端激酶在大鼠脑缺血再灌注不同时间的表达 及相关研究 研究生：孙红玉 专业：老年医学 导师：马英文教授 中文摘要 目的： 1．探讨磷酸化的c-Jun氨基末端激酶在大鼠脑缺血再灌注后脑组织中的表达。 3．为JNK抑制剂成为缺血性脑血管病治疗的靶点进行铺垫。 方法： reperfusion 对照组(3只)、假手术组(Shamgroup，3只)、缺血再灌注组(Ischemiagroup， 取组3只)、缺血再灌注+二甲基亚砜组(Ischemiareperfusion+DMSOgroup，DM组 28 只)和缺血再灌注+二甲基亚砜+SP600125 组(Ischemia reperfusion+DMSO+SP600125 鼠局灶性大脑中动脉缺血再灌注模型，缺血后2h行再灌注。 1．采用longa神经功能缺损评分标准观察大鼠神经行为学改变。 2．采用TTC染色法观察梗死组织面积。 3．采用HE染色法观察神经元的变化。 4．分别采用免疫组化及免疫印迹法检测大鼠不同时间点脑组织中磷酸化c—Jun 氨基末端激酶的表达。 5．观察JNK抑制剂SP600125对磷酸化c-Jun氨基末端激酶表达的影响。 结果： ． 1．线栓法制各大脑中动脉缺血再灌注模型成功率为75．6％。对照组及假手术组无 症状，DM组神经功能缺损症状最重。．再灌注6h～12h神经功能缺损症状明显，再灌 l 改善。DM组与正常对照组及假手术组比较，神经功能评分差异有统计学意义(P 0．01)，再灌注24～72h神经功能缺损评分差异无统计学意义(P0．05)。 2．TIC染色中正常对照组及假手术组均未发现病灶，取组、DM组、SP组均发 现大脑中动脉供血区梗死灶，SP组在再灌注各个时间点的梗死灶与DM组比较均减 小，HE染色可见梗死区神经元细胞呈缺血坏死性改变。 3．免疫组化研究显示：对照组及假手术组大鼠神经元、神经胶质细胞棕褐色染 色阴性。DM组再灌注6h神经元、神经胶质细胞胞核呈棕褐色染色；再灌注12h胞 核浓染，阳性细胞数增多；再灌注24h阳性细胞数减少；至72h阳性表达仍持续较高 水平。SP组大鼠神经元、神经胶质细胞核为浅或中等程度棕黄色颗粒沉积，阳性细 胞数较DM组减少(尸0．05)。 4．免疫印迹研究显示：DM组再灌注6h脑组织p-JNK表达升高，在12h达高峰， 著降低(P0．01)，高峰不明显(P0．05)。 结论： 实验结果表明，在大鼠脑缺血再灌注损伤后，p-JNK的活性呈时间依赖性增高，同时 该作用可以被SP600125所抑制，提示JNK在缺血再灌注诱导的细胞凋亡过程中起正 性调节作用，SP600125通过特异性抑制JNK活性而对神经元发挥保护作用，它可能 可以作为缺血性脑损伤后的治疗靶点。 关键词：C．Jun氨基末端激酶脑缺血再灌注 SP600125 2 THEEXPRESSIONANDRELATEDRESEARCHOFC．JrI J]N N．TERT沮NAI．ⅪNASEAFTERCEREBRAI． ISCHEM匝A．REPERFUSION矾J1JRYDiRATS Sun Hongyu