Bufalin、β-榄香烯及PS-341对肾细胞癌的抗肿瘤作用及机理研究.pdfVIP

·中文论著摘要· 及机理研究 目 的 肾细胞癌约占成人恶性肿瘤的3％，发病时约30％病例为晚期。由于肾癌细 胞高度表达耐药基因，故对常规的化疗无效。晚期肾癌的治疗以免疫治疗为主， 但有效率仅10％左右。近年来丌发的新型分子靶向药物如舒尼替尼和索拉菲尼等， 使得晚期肾癌的疗效有了一定提高，但由于价格昂贵，多数患者难以负担。因此， 有必要寻找高效低毒，且价格相对低廉的新型抗肿瘤药物，以进一步提高晚期肾 癌的疗效。 细胞(如肺癌、结肠癌和胶质瘤)的增殖。但关于它们对肾癌有无抗肿瘤作用目 美国食品与药品管理局(FDA)批准用于多发性骨髓瘤和套细胞淋巴瘤的治疗。 小样本临床研究结果提示硼替佐米对转移性肾细胞癌有效，但其具体抗肿瘤作用 及机制需要进一步研究。 细胞内调节增殖及凋亡的信号通路主要有核因子．KB(nuclearfactor-rd3， kinases，MAPK) NF—vd3)通路、丝裂原活化蛋白激酶(Mitogen．activatedprotein 通路和P13刚Akt／mTOR通路等。这些信号传导通路的活性对药物的抗肿瘤作用具 有重要的影响，抗癌药物可通过改变这些通路的活性抑制细胞增殖，诱导凋亡。 of 哺乳动物雷帕霉素靶蛋(mammaliantargetrapamycin，mTOR)是一种丝／苏氨 酸蛋白激酶，位于Akt的下游，能激活p70S6K1等来增强mRNA的转录和翻译， 进而增加一系列细胞生长相关蛋白的表达，引起细胞快速增殖。目前NCCN指南 推荐的用于治疗转移性l肾癌的药物中有两种是mTOR抑制剂，可见mTOR是治疗 肾癌的重要靶点。mTOR还是自噬的负性调控因子，抑制mTOR活性可诱导自噬 发生。研究表明一些抗肿瘤药物在诱导细胞凋亡的同时可激活白噬反应，抑制自 噬可增强药物的抗肿瘤作用。目前药物诱导的保护性白噬己成为肿瘤耐药的研究 热点。 本研究以肾透明细胞癌786．0细胞为模型，探讨新型抗肿瘤药物bufalin，D． 榄香烯和PS一341对786—0细胞活力，凋亡及周期分布的影响，并进一步研究药物 以寻找治疗肾癌的有效药物。 材料与方法 1．采用MTT方法测定细胞活力，绘制生存曲线。 2．采用流式细胞术PI染色进行细胞凋亡及细胞周期检测。 3．采用Westernblot法检测蛋白的表达。 4．采用透射电镜技术观察自噬的形态学变化。 t 5．统计学分析：数据以均数±标准差表示。 两组问差异采用Student’S test分析。P0．05认为有统计学意义。 实验结果 l i 一、Bufa n、13一榄香烯和PS-341对肾细胞癌的抗肿瘤作用 (一)传统化疗药物及生物制剂对786—0细胞活力的影响 不同浓度的阿霉素(ADM)、顺铂(CDDP)作用于786．0细胞24h，氟尿嘧啶 (5-FU)作用于786—0细胞48h，细胞活力仅轻度受抑制。与此类似，不同浓度的 TNF和IL一2处理细胞24或48h，细胞活力无明显变化。 (二)Bufalin、B一榄香烯及PS-341对786—0细胞活力的影响 h，抑制细胞50％的药物浓度 不同浓度的bufalin作用于786．0细胞24、48和72 nmol／L、24．46 nmol／L并114．43 (IC50)分别为77．62 nmol／L；p．榄香烯在24、4851 72 h细 h的IC50分别为145．60gg／mL，126．90gg／mL$163．