Calpain在大鼠炎性疼痛模型中作用的探究.pdfVIP

Calpain在大鼠炎性疼痛模型中作用的研究 中国医学科学院北京协和医学院北京协和医院 博士生： 王静捷 导师：黄宇光教授 中文摘要 背景：外周组织炎性损伤可以产生对初级疼痛感受器和C纤维的持续刺激，导 致脊髓伤害性神经元的兴奋性增强，进而引起痛觉过敏和触诱发痛。研究证实， 转录因子NFrB是促炎细胞因子、粘附分子以及血管活性介质等可诱导蛋白表达 的关键物质，在炎症病理生理过程中发挥重要的作用，并且参与炎性疼痛的形成。 同时，大部分通过抑制NFrB活性来抑制炎性反应的物质也显示出抗伤害性反应 的效果。因而，寻找可以抑制NFr,B活化的物质成为治疗炎性疼痛的方法之一。 Calpain是一种钙离子依赖半胱氨酸蛋白酶，参与许多生理和病理过程。有研究 参与炎性疼痛的发生，而如果抑制Calpain活性则可能缓解炎性疼痛。因此，细 以更加深入的理解炎性疼痛的发生机制，以期发现更具针对性且更有效的疼痛治 疗靶点。 3 第一部分Zymosan足底炎性疼痛模型大鼠脊髓背角 Calpain活化水平的改变 目的： 建立Zymosan足底炎性疼痛大鼠模型，采用行为学和Westernblot方法，研 及下游Ird3a、胞核NFrd3的表达变化。 材料与方法： 学测定结束后处死)、假手术组(n=16，8只于制模后4h处死，8只继续行为学 处死8只)。按Meller方法通过在大鼠左侧后足皮下注射zymosan1．25mg制作 zymosan足底炎性疼痛模型，假手术组在左侧后足皮下注射同等容积的PBS。采 用Von 组大鼠左侧后足MWT，并使用电子数显卡尺测量左足最大厚度。各组大鼠在指 定时间点处死后取制模侧腰段脊髓背角，采用Westernblot方法测定脊髓背角中 Calpain降解底物spectrinalI的表达变化以判断Calpain的活性，并测定下游Ir．Ba 和胞核NFl‘：B表达情况。 结果： 8h、24h和48h 大鼠出现炎性痛觉过敏。 鼠出现炎性水肿。 alI 增强。 4 下降(PO．01)，胞核NFr．B表达明显增加(P0．01)。 结论： 能参与炎性疼痛的形成。 的形成。 痛模型大鼠的镇痛作用及其对脊髓背角COX．2表达水平的 影响 目的： 痛作用和对脊髓背角COX．2表达的影响，进一步探讨Calpain在炎性疼痛中的作 用机制。 材料与方法： 第一部分。Z+A组大鼠在制模前30min腹腔注射Calpain抑制剂ALLN20mg／kg， Frey 观察镇痛效果；并使用电子数显卡尺在相同时间点测量各组大鼠左足最大厚度。 各组大鼠在相应时间点处死取制模侧腰段脊髓背角，采用Westernblot方法测定 腰段脊髓背角中COX．2的含量变化。 ． 结果： 1．Z+V组大鼠疼痛仍持续存在，MWT与sham组大鼠相同时间点比较有 5 48h MWT虽仍显著降低，与sham组大鼠相同时间点比较有显著差异 明显下降(PO．05)，提示疼痛明显缓解。 2．z+V组大鼠制模后各时间点左足最大厚度仍显著增加，与sham组大鼠 相同时间点比较有显著差异(PO．01)。Z+A组大鼠制模后各时间点左足 最大厚度虽然仍显著增加，与sham组大鼠相同时间点比较有显著差异 度与Z+