中药与制药.微生物学实验.ppt

医学微生物学实验室规则;目的要求: 1、了解微生物学实验室常用消毒灭菌仪器设备 2、了解空气、皮肤细菌检查方法 3、掌握药品的微生物学检验程序和方法;一.药品的微生物限度检查（一）;口服药 外用药; 将剩余口服药以10-1 10-2 10-3 10-4 进行稀释(以生理盐水稀释) ;二.空气、皮肤细菌检查方法(验证) 三.微生物学实验室常用消毒灭菌仪器设备： 高压蒸汽灭菌锅 消毒煮沸器 G6玻璃滤菌器装置 洁净工作台 移动式 紫外光灯 鼓风式干烤箱 紫外线杀菌标本。;厌氧工作站;一、目的要求: 1、了解细菌培养接种技术 2、掌握细菌基本形态 3、掌握药品的微生物学检验程序和方法 二、实验内容 1.药物的微生物限度检查（二） 2.空气、皮肤细菌检查结果测定。 3.讲授基础培养基的制备方法（营养琼脂、营养肉汤）。 4.培养基的种类和用途 普通培养基、营养培养基、厌氧培养基、选择培养基 5.细菌在三种不同物理性状培养基上的接种方法(基本技能) 液体培养基 平板培养基 斜面培养基 双糖含铁半固体斜面培养基 6.显微镜下观察 细菌的基本形态: 球菌、枯草杆菌、霍乱弧菌。 特殊结构： 肺炎荚膜、变形鞭毛、破伤风芽胞。;一、空气、皮肤的细菌检查结果;二、培养基的制备;培养基的制备程序;;平行划线法; ;菌落;斜面移种技术;菌苔;;穿刺技术 ; 取出前次实验培养物观察： 1.口服药物 1)细菌鉴定： 在胆盐乳糖增菌液中有无细菌生长： 增菌液变混浊―――――有 -----接种在伊红美兰琼脂平板培养基 上面。 方法：分区划线接种。 2)细菌总数测定： 选择30-300个菌落平板， 细菌总数＝菌落数×稀释倍数;2.外用药 1)判定胆盐乳糖增菌液培养物及亚碲酸钠增菌液培养物有无细菌生长： 增菌液变混浊―――有 2)细菌鉴定： （1）将胆盐乳糖增菌液培养物无菌接种在16烷三甲基溴化胺琼脂斜面培养基上面。 方法：斜面化线接种； （2）将亚碲酸钠增菌液培养物，无菌接种在卵黄高盐琼脂平板培养基上面。 方法：分区划线接种。 37℃恒温孵育箱24小时培养后，观察结果。;细菌基本形态;葡萄球菌;链球菌;大肠埃希菌;枯草杆菌;霍乱弧菌;细菌特殊结构;破伤风梭菌;一、目的要求: 1、了解细菌的生长现象及代谢产物的观察 2、掌握药品的微生物学检验程序和方法 二、实验内容 1.药物的微生物限度检查（三） 2.细菌的生长现象及代谢产物的观察 1）液体培养基---沉淀、浑浊、表面生长现象。 2）三葡、三链、大肠与副伤乙培养基的菌落特征、溶血环观察。 3）双糖含铁培养基--- 动力、气体、硫化氢、分解乳糖观察。 4）结核杆菌菌落的观察。 3.中草药、抗生素抑菌试验 1）中草药---大蒜汁、黄连、黄芩、黄柏。 2）抗生素---青霉素、庆大、氨苄、新诺明、生理盐水。;1）从伊红美兰琼脂平板培养基上----- 挑取黑色带有金属光泽的湿润菌落，接种在普通琼脂斜面培养基上面，进行细菌的纯培养。 2）观察外用药物在16烷三甲基溴化胺琼脂斜面培养基上生长状况。 记录被检菌色素的溶解性质、液化明胶的状况及菌苔粘稠度等。 革兰氏染色镜下观察其菌落形态。 根据上述被检菌落的生物性质和状况及细菌形态，确定该被检菌的名称。 3）从卵黄高盐琼脂平板培养基上生长，挑取黄色的湿润菌落，接种在普通琼脂斜面培养基上面，进行细菌的纯培养。;2.细菌的生长现象及代谢产物的观察;菌膜生长;;;;肠道杆菌双糖铁培养基结果比较;革兰染色步骤;;1、制片涂片、干燥、固定;2.结晶紫初染 1min——水洗;3. 碘液媒染 1min——水洗;4. 95% 酒精脱色 30s——水洗;5.沙黄复染