dsRNAs上调若干肿瘤抑制基因和其对膀胱癌治疗作用的研究.pdfVIP

浙江人学博l：学位论义 摘葛 dsluNAs上调若干肿瘤抑制基因及其对膀胱癌 治疗作用的研究 浙江大学医学院附属第一医院泌尿外科 专 业 泌尿外科学 博士研究生 杨 凯 导 师 谢立平 摘要 近年来研究发现序列特异性靶向某些靶基因启动子区的双链小RNAs(dsRNAs) 能引起人肿瘤细胞内靶基因转录水平的表达上调，并将此现象命名为RNA诱导的 生机制方面的研究显示表观遗传学修饰和反义转录产物与RNAa的发生密切相关。 然而，目前对RNAa的普遍性、作用机制以及设计原则的了解仍较肤浅，且在RNAa 的发生机制方面存在一些争议。 本研究旨在探讨RNAa现象的普遍性、明确其具体发生机制、完善saRNAs的 设计规律以及评估其治疗应用的可行性，主要研究内容及成果如下： 1)本文针对肿瘤抑制基因p21、par一4、KAll和NKX3-1基因启动子区设计了 若干对双链小RNAs，利用RT-PCR反应和蛋白印迹验证及挑选了能有效上调靶基因 是由dsRNAs的设计位点和细胞本身的遗传背景及特征共同决定的。 达方面的异同，发现功能性saRNhs的靶点沿基因启动子区序列向上游或下游位移 浙江人学博lj学位论义 摘要 1～2个碱基能获得1～2对新的功能性saRNhs。同时，结合以往发现的功能性 saRNhs，分析总结它们的序列特征，发现其正义链3’端碱基具有一定的规律，可 能与其功能有关。 修饰的影响，发现dsPar4-4 35作用靶点附近的染色质H3K9二甲基化减少和H3K4 二甲基化增加，而H3K9的乙酰化状态无明显改变，提示表观遗传学修饰的变化趋 势虽与RNAa现象一致，但是其具体改变可能因基因的不同而存在一定的差异。利 用PCR检测提示各种细胞中par-4基因启动子区均存在转录产物，以反义RNA为 主，它在dsPar4-435作用后表达略有上升，但确切的作用机制仍需进一步研究探 索。 4)利用MTT法、流式细胞术以及蛋白印迹等评估功能性saRNAs对膀胱癌细 胱癌细胞的生长，说明saRNhs上调基因表达对膀胱癌具有一定的治疗效果和应用 前景。 总之，RNAa现象具有一定的普遍性，其作用机制与表观遗传学修饰和反义转 录产物有一定的联系；同时，saRNAs对膀胱癌细胞的体外治疗效果明显，为将来 恶性肿瘤及其他疾病的临床治疗应用提供了理论依据。但是，RNAa现象的确切机 制、设计规律以及治疗应用的体内实验等工作还需进一步研究完善。 关键词：RNAa，saRNAs，肿瘤抑制基因，表观遗传学，反义转录产物，膀胱 癌。 IV 浙江人学博l：学位论义 摘要 oftumor dsRNAsandits suppressivegenesby Up--regulation effectsonbladdercancer therapeutic of FirstAffiliated DepartmentUrology,the Hospital， Medical of CollegeZhejiangUniversity Major： Urology M．D．Student： Kai