Egr-1特异脱氧核酶对大鼠颈总动脉球囊损伤术后PAI-1及TF表达的影响.pdfVIP

·中文论文摘要· Egr-1特异脱氧核酶对大鼠颈总动脉球囊 损伤术后纤溶酶原激活物抑制因子1 和组织因子表达的影响 刖 吾 经皮腔内冠状动脉成形术(Percutaneous coronary smoothmuscle 发现，血管平滑肌细胞(vascular cell，VSMC)增殖所致血管内膜的增 生是RS的重要病理特征，而血管成形术后早期富含血小板的血栓形成与VSMC增殖、 activator 迁移和转型密切相关。纤溶酶原激活物抑制因子．1(plasminogen 平和活性升高有关，抑制高活性PAI．1将对早期血栓形成及血管再狭窄的防治起到重 要作用。TF，又称组织凝血活酶，是目前已知最有效的凝血途径天然启动子。PTCA 术引起动脉血管内膜撕裂，使TF释放至血液，启动外源性凝血机制，从而导致局部 血栓形成。TF除了有促凝作用外，它作为细胞膜的受体，可介导SMC的迁移和增生， 作为一种基因抑制剂有着实际的治疗作用。早期生长反应因子一l(earlygrowthresponse 血栓形成、VSMC的分裂、增殖和内膜增生等过程有着重要的作用。本研究拟在建立 血管球囊损伤实验动物模型的基础上，进一步观察Egr-1的特异脱氧核酶(10．23DRz， ED5)对大鼠动脉损伤后PAI．1及TF的作用，探讨其在血管损伤后抑制内膜增生的作 用机制。 材料与方法 一、合成ED5(由上海博亚生物技术有限公司合成)，碱基序列为： 进行硫代修饰，5’端用FITC标记，以便于在荧光显微镜下观察转染后基因的分布 情况。两侧下划线所示部分为寡核苷酸识别序列。 二、实验分组及动脉损伤的模型建立和基因转染损伤动脉： 用10％水合氯醛(0．3mg／g)麻醉后，于无菌条件下行颈正中切开，钝性分离左颈总动 脉近心、远心端血流，用2F导管从颈外动脉插入左颈总动脉内，推入0．2mL生理盐水 充盈气囊，反复抽拉球囊3次，造成左颈动脉内膜损伤。撤除球囊后，将2001．tl含有 FITC．ED5 lmmol／L 500pg、转染试剂FuGene6301．d、170p1 Mgcl2的溶液局部注入至损伤 的血管节段内，使其在局部作用20分钟。转染治疗基因24h后，取治疗组大鼠局部血 管的冰冻切片置于荧光显微镜下，用470．490nm光激发，可见残存血管内膜及中膜较对 照组有大量绿色荧光分布，证明转染成功，显微镜下观察荧光强度、分布并拍照。FuGene6 mmoVL 组局部注入200pl含有转染试剂FuGene30山、170p1 Mgcl2的溶液：单纯损伤组 lmmol／L 局部注入2001．d Mgcl2液；假手术组只进行颈动脉结扎，但不插入导管。术后 结扎颈外动脉，恢复血流，缝合颈部创口。术后局部使用青霉素以预防感染，喂食标准 测。取病变处血管用于HE染色检测及免疫组化观察。 三、所用试剂 纤溶酶原激活物抑制剂1、组织因子ELISA试剂盒购至RD公司；ED5购 crBz公司 兔抗大鼠单克隆抗体购自Santa 四、统计学处理 所有数据采用SPSSl3．0软件包进行统计分析，计量资料以均数4-标准差 (茗士s)表示，均数比较采用单因素方差分析，组间的多重比较采用LSD检验， P0．05为差异有显著性。 2 实验结果 一、血管病理形态学改变 光镜下可见：假手术组，血管内膜由一层完整的内皮细胞覆盖，无内膜增生； 大鼠颈总动脉拉伤后，可见内皮剥脱，说明球囊拉伤内膜模型成功；血管损伤后 3d可见Mgd2对照组和FuGene6对照组内膜剥脱，尚无内膜形成，血管壁内膜附 内