Egr-1诱寡核苷酸下调MMP-9抑制原代培养大鼠血管平滑肌细胞的迁移.pdfVIP

目 录 一、摘要 中文论著摘要……………………………………………………………………l 英文论著摘要……………………………………………………………………3 二、英文缩略语………………………………………………………………………5 三、论文 —U．一t一 刖茜………………………………………………………………………………6 材料和方法……………………………………………………………………7 实验结果………………………………………………………………………11 讨论………………………………………………………………………………16 结论………………………………………………………………………………18 四、本研究创新性的自我评价………………………………………………………19 五、参考文献…………………………………………………………………………20 六、附录 综j苤……………………………………………………………………………23 在学期间科研绩………………………………………………………………37 致谢……………………………………………………………………………38 个人简介………………………………………………………………………39 ·中文论著摘要· Egr-1诱骗寡核苷酸下调MMP．9抑制原代培养的大鼠 血管平滑肌细胞的迁移 目 的 通过转染针对早期生长反应因子一1(earlygrowthresponsefactor-I，Egr-1)的诱 ODNs)到大鼠动脉血管平滑肌细胞中，检测各组早期生 骗寡核苷酸(Egr-1decoy 长反应因子一l、基质金属蛋白酶一9(Matrix smooth 化及测量各组平滑肌细胞(vascularmuscle cell，VSMC)的迁移，探讨针 对早期生长反应因子一1的诱骗寡核苷酸对体外培养的大鼠平滑肌细胞迁移的影响 和作用机制。 方 法 通过组织块贴壁法进行原代大鼠动脉血管平滑肌细胞培养、传代培养和鉴定， 设计合成Egr-1诱骗、诱骗对照寡核苷酸。转染人工合成的针对Egr-1的诱骗寡核 苷酸(Egr-1decoyODN)，将培养的平滑肌细胞分为对照组(正常培养细胞)、诱 骗组(转染Egr-I的诱骗寡核苷酸)、诱骗对照组(转染Egr-I诱骗杂码寡核苷酸)。 免疫组织化学染色法检测各组不同时间Egr-I及基质金属蛋白酶．9(MMP．9)蛋 白的表达，进行图像分析。对各组采用划痕法测定平滑肌细胞的迁移距离。所有 数据均采用SPSSl3．0统计软件进行统计分析，计量资料以均值士标准差(jF士S) 表示，各组间比较应用单因素方差分析，P0．05有统计学意义。 结果 成功进行原代VSMC培养，经细胞鉴定培养细胞为高纯度的血管平滑肌细胞。 转染Egr-1诱骗寡核苷酸后，用免疫组织化学法分别观察各组不同时间点的Egr-1 和MMP一9蛋白的表达情况。实验发现：Egr-1诱骗寡核苷酸转染后诱骗组的迁移距 离明显低于诱骗对照组和对照组(P0．05)，诱骗对照组和对照组没有明显的差 异。同时发现Egr-1诱骗寡核苷酸转染后Egr-1及MMP．9蛋白在诱骗组的表达较 低，与诱骗对照组和对照组比较具有统计学差异。 结论 本实验通过体外转染Egr-1的诱骗寡核苷酸在一定程度上能够通过抑制Egr-1 蛋白的表达，抑制其下游MMP．9基因的表达，减少血清诱导的平滑肌细胞的迁移， 从而达到抑制细胞迁移的目的。 关键词 早期生长反应因子-1；基质金属蛋白酶．9；诱骗；平滑肌细胞；迁移 2 ·英文论著摘要· factor-1 Earlygrowthresponse decoy