EIF-5A2基因在结直肠癌、卵巢癌及膀胱癌中的临床病理学意义及功能的初步研究.pdfVIP

EIF-5A2基冈在结商肠癌、卵巢癌和膀胱癌llI的临床病理学意义及功能的初步研究 f／户捌2基因在结直肠癌、卵巢癌和膀胱癌中的临床 病理学意义及功能的初步研究 专 业：肿瘤学 博士研究生：花文峰 导 师：谢丹教授 摘要 研究背景与目的：近年来细胞遗传学的研究发现，在人类头颈、食管、乳腺、 肺、胃肠、卵巢、前列腺、和膀胱等众多恶性上皮性肿瘤中存在染色体3q或 3q部分区段的高频扩增。提示在染色体3q的某些DNA扩增区存在一个或多个 关键的癌基因，其扩增与表达异常可能在肿瘤的发生发展中发挥重要作用。2001 年，Guan等应用染色体微切割及筛选杂交技术，从卵巢癌细胞的3q26．2高扩增 区段克隆了一个新的候选癌基因一P删乙由于该基因编码的蛋白与真核翻译 initiationfactor 起始因子EIF-5A(eukaryotic5A)有82％的同源性，所以 该基因被命名为elF-SA20以往的研究表明，P删基因在细胞生长和增殖中 具有重要的作用；在HeLa细胞和中国仓鼠卵巢上皮细胞中，当ElF一5A蛋白被 抑制时，其细胞生长与增殖受到明显抑制，而且可以引发细胞的凋亡。我们在 卵巢癌的前期体内外研究中发现，P㈣2基因在肿瘤的发生发展过程中起重 要的癌基因作用；EIF一5A2蛋白的过度表达与卵巢癌的恶性进展有明显的相关 性。由于结直肠癌和膀胱癌等许多恶性上皮肿瘤中也存在3q或3q部分区段的 高频扩增，那么在结直肠癌和膀胱癌等恶性肿瘤中是否也存在着elF-SA2基因 的扩增与异常表达?其是否与肿瘤的恶性进展密切相关?能否成为评估肿瘤预 后的新分子标记物?等等，目前国内外尚未见文献报道。因此，本课题旨在探 EIF-5A2基冈在结直肠癌、卵巢癌和膀胱癌巾的临床病理学意义及功能的初步研究 索eIF-SA2基因在结直肠癌、膀胱癌和卵巢癌中的扩增与表达情况及其临床病 理学意义；同时探讨其在结直肠癌细胞中的癌基因作用。 材料和方法： 1．病例收集：收集中山大学附属肿瘤医院、中山大学附属第一医院和广东省 人民人医院1990年N2005年问的结直肠肿瘤、卵巢肿瘤和膀胱癌患者手术切 除的石腊包埋组织标本及其相关的临床病理学资料。在本研究选取的结直肠 癌病例中，包括139例进行局部结直肠癌切除术的肿瘤组织和相应的癌旁正常 粘膜组织；同时，收集了22例伴发的结直肠腺瘤的标本和42例结直肠癌转移 病灶标本。在选取的170例卵巢肿瘤病例中，包括有30例良性腺瘤、30例交界 性肿瘤和110例恶性肿瘤；同时选取30例卵巢正常组织作为对照。在膀胱癌 病例的挑选中，选取了两组接受不同治疗方法的膀胱癌病例，一组为90例浸 润型膀胱癌(接受根治性膀胱切除术)和50例癌旁的正常膀胱粘膜组织，另 一组为112例浅表性(pTa／pTl)膀胱癌(接受经尿道膀胱肿瘤切除术)和30 例相应的癌旁正常膀胱粘膜组织。另外，我们同时也收集了13对新鲜的浅表 性(pTa／pTl)膀胱癌组织及其癌旁的正常粘膜组织。 2．方法：本研究中我们在构建组织芯片的基础上，应用免疫组化、RT—PCR、蛋 白印迹和荧光原位杂交的方法，检测P删磷因在结直肠癌、卵巢癌和膀胱 癌中的表达与扩增，并结合肿瘤的临床病理学和预后资料，分析它们之问的 相关性。在P删鹰因功能的体外研究中，我们设计并构建RNA干扰的体外 表达质粒，转染进入结直肠癌SW480细胞中并筛选稳定表达的克隆。应用 l侵袭 小室和平板克隆等实验方法研究细胞的增殖和体外侵袭浸润的能力。 结果： I．e删瑾因在结直肠癌、卵巢癌和膀胱癌中的表达与扩增及其 临床意义 1．结直肠癌：免疫组化结果显示，分别有35．3％的结直肠腺瘤，53．2％的原发 而全 性结直肠癌和67．6％的转移性癌组织出现EIF一5A2蛋白的过度表达： EIF-5A2基冈在结直肠癌、卵巢癌和膀胱癌中的临床病理