Embelin对HL60细胞凋亡的作用.pdfVIP

目 录 一、摘要 中文论著摘要……………………………………………………………………l 英文论著摘要……………………………………………………………………4 二、英文缩略语………………………………………………………………………7 三、论文 前言……………………………………………………·G仔U吾…………………………………………………”。 00 0……………………8“………“………”苎 材料与方法………………………………………………………………………8 实验结果………………………………………………………………………12 讨论……………………………………………………………………………16 结论…………………………………………………………………·…·……·17 四、本研究创新性的自我评价……………………………………………………18 五、参考文献………………………………………………………………………19 六、附录 综述(含参考文献)…………………………………………………………20 在学期间科研成绩……………………………………………………………27 致谢…………·………………………………………………………………··28 个人简介………………………………………………………………………29 ·中文论著摘要· Embelin对HL60细胞凋亡的影响 刖 罱 Embelin是一种中药提取物，最初主要用于抗感染、抗炎症以及抗增殖等方面 inhibitorof 白(X．1inked apoptosis (BaculovirusIAP mitochondrialactivator 子抑制剂。 目 的 本研究旨在探讨Emblin对人白血病细胞系HL60细胞凋亡的影响以及可能的 作用机制。 方 法 一、细胞培养及实验分组 人白血病细胞系HL60细胞在37C、含5％C02、饱和湿度的培养箱中培养， 于含10％dx牛血清、100u／ml青霉素和100lxg／ml链霉素的RPMI一1640培养液中， 每2-3 细胞对照组和溶剂对照组。 二、MTT法检测细胞活性 取对数生长期的HL60细胞，调细胞密度为1x105／ml接种于96孔培养板中，每个 20 r 处理均做8个复孔，常规培养12、24、48h后，每孔分别加MTTpl，再培养4h，2000 O 1 0 nlTI ／min，离，t二,lmin，弃去上清，每孔加DMSO50江，，振荡1min，用酶标仪钡U570 的A值。按如下公式计算：细胞增殖率％=(实验组A／对照组A)x100％，相应的细 胞增殖抑制率％=[(对照组A-实验组A)／对照组A】x100％。 三、Annexin V原ITC复染流式细胞术检测细胞凋亡率 在待测细胞(1x105／m1)中加入AnnexinV-FITC和PI，使其终浓度分别为 下象限为凋亡细胞(FITC+／PI．)。 四、JC．1染色荧光显微镜(单色滤光片)观察 的细胞，取5001xlJC一1工作液将细胞均匀悬浮，37。C、5％C02的培养箱中孵育 Buffer洗2 1×IncubationBuffer重新悬浮细胞；滴一滴上述细胞悬液于载玻 次；吸取500}tL 片，盖上盖玻片，于荧光显微镜下观察；正常细胞：单色滤光片下观察为黄绿色； 凋亡细胞：单色滤光片下观察则为绿色。 五、Western 收集经过不同处理的细胞标本，使用细胞裂解液制备细胞总蛋白，以Bradford 蛋白分析系统检测蛋白浓度。取等量总蛋白上样进行SDS．PAGE凝胶电泳，转膜过 加入显影剂，暗室显影。 六、统计方法 所有指标均