eIF4E及膀胱癌浸润转移的关系及体内外抑制eIF4E表达的实验研究.pdfVIP

摘要 eI I F4E F4E与膀胱癌浸润转移的关系及体内外抑制e 表达的实验研究 博士研究生单中杰 导 师魏金星 摘要 膀胱癌是我国最常见的恶性肿瘤之一，其发病率位居世界肿瘤第7位，最 常见的膀胱癌来源于尿路上皮癌。膀胱癌的发生发展是多基因参与、多阶段性 及多种因子调控的过程，因此深入研究膀胱癌发生中的基因调控的机制并且探 索行之有效的防治措施和方法是膀胱癌目前诊断和治疗中的重点及难点，对于 膀胱癌的防治具有非常重要的意义。 initiationfactor Eukaryotic 4E(真核始动因子4E，eIF4E)为真核生物蛋白合成 的重要调控因子，在蛋白合成的起始阶段有着相当重要的作用。相关研究表明， eIF4E的高表达与多种肿瘤的发生有着密切的关系。近几年来，有文献先后报道 了eIF4E因子的高水平表达或活性提升与头颈部鳞癌、子宫颈癌、乳腺癌、食管 癌、结肠癌等多种肿瘤发生、发展密切相关，在浸润性膀胱尿路上皮癌中elF4E 因子的表达及与肿瘤的发生和发展的关系，目前国内外尚无相关系统的研究报 道。 为深入的探讨elF4E因子与浸润性膀胱尿路上皮癌得到发生及发展的关系， 并为了寻找到抑制浸润性膀胱尿路上皮癌的发生及发展的行之有效的方法，本 研究首先应用免疫组化及原位杂交联合检测了浸润性膀胱尿路上皮癌、膀胱乳 白和mRNA的表达水平，探讨了elF4E表达与HPA的相关性。在此基础上，采 用脂质体介导方法将3条elF4E反义寡核苷酸(觚tiseIlse 序列以不同浓度、不同作用时问转染膀胱癌BIU．87细胞，采用免疫细胞化学、 Western 摘要 氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记测定法(TUNEL)及流式细胞术 (FCM)检测每组细胞的凋亡变化情况，并且筛选出来最好的转染序列。通过 构建膀胱癌裸鼠移植瘤模型，用反转录PCR(RT．PCR)、原位杂交技术、免疫 组织化学(IHC)的方法来检测裸鼠的膀胱癌移植瘤组织中的eIF4E基因表达。从 体内角度观察eIF4E基因对裸鼠移植瘤的作用，试图阐明eIF4E的表达在浸润性 膀胱尿路上皮癌发生、发展中的意义，为膀胱肿瘤的生物靶向治疗提供理论依 据。这里分为三个部分来阐述。 l 第—部分浸润性膀胱尿路上皮癌eF4E、HPA的表达及意义 方法 例浸润性膀胱尿路上皮癌、30例膀胱乳头状瘤及50例正常膀胱黏膜组织中的表 达情况 2．采用免疫组织化学及原位杂交检测HPA蛋白及mRNA在50例浸润性膀 胱尿路上皮癌、30例膀胱乳头状瘤及50例正常膀胱黏膜组织中表达的情况。 处理，两样本率的比较采用f检验、两样本均数的比较采用t检验和方差分析， 相关性分析利用Spearman相关系数进行分析。 结果 膀胱乳头状瘤细胞、膀胱癌细胞及正常膀胱粘膜上皮细胞胞质内。 2．免疫组化及原位杂交检测eIF4E结果显示：在正常膀胱粘膜、膀胱乳头 状瘤和浸润性膀胱尿路上皮癌组织中，elF4E蛋白和mRNA表达的水平依次的 升高，三组问比较的差异有统计学的意义(PO．05)。且与组织学分级、浸润 及淋巴结转移有关(P0．05)。 3．免疫组化及原位杂交检测HPA结果显示：在正常膀胱粘膜、膀胱乳头 状瘤和浸润性膀胱尿路上皮癌组织中，HPA蛋白和mRNA表达的水平的依次升 高，三组间的比较的差异有统计学的意义(尸O．05)。且与组织学分级、浸润 Ⅱ 摘要 及淋巴结转移有关(PO．05)。 性(产0．504。P0．05)