自体颗粒骨磷酸钙骨水泥复合细胞.PDF

中国骨质疏松杂志 2005年 5月第 l1卷第 2期 ChinJOsteoporos，May．2005Vol11，No．2 225 · 临 床 研 究 · 自体颗粒骨磷酸钙骨水泥复合细胞 移植的实验研究 杨显声 阎景龙 麻松 摘要 ：目的 探索应用 自体颗粒骨磷酸钙骨水泥复合细胞修复骨缺损的效果 。方法 分离 、 定向诱导和扩增骨髓间充质干细胞 (MSCs)，观察其在体外培养的情况 。体外复合 自体颗粒 骨与磷酸钙骨水泥，然后复合MSCs，并以电镜观察复合物在体外培养的情况 。在动物模型 中，以不 同的复合物植入大鼠直径 5mm的颅骨缺损 ，并于术后摄 x线片及进行组织学观察。 结果 颗粒骨 、CPC和 MSCs的复合材料可 以修复骨缺损，效果优于其他实验组 ，相 比较有 显著性差异 (P0．05)。结论 颗粒骨、CPC和 MSCs的复合材料可以再生骨组织 ，可 以用 于修复骨缺损 。 关键词 ： 颗粒骨；磷酸钙骨水泥 ；骨髓间充质干细胞 Studyoftransplantationofautogeneticmorselizedbonewith theCPC andMSCs YANG Xiansheng， YAN Jinglong，MA Song．SpineandJointSurgery，theFirstAffiliatedHospitalofHarbin M edicalUniversity，Harbin150000，China Abstract：Objective Tostudytheefficiencyofrepairingthebonedefectwiththecompoundofautoge— nousmorselizedbone，calcium phosphatecementandmesenchymalstem cells．Methods MSCswas seperated，inducedandproliferatedinvitro．Themixtureofmorselizedbone，CPC andMSCswere culturedandplantedtOthecranialdefectsinrats．HistologicalandX-rayexaminationswereper— formedaftertheoperation．Results Thecompoundcanrepairthedefecteffectivelyat4and8weeks anditissignificantlythantheotherexperimentalgroups． (户O．05)Conclusions Thecompoundof morselizedbone。CPC andMSCscanbeusedtOrepairthedefectofbone． Keywords：Morselizedbone；Calcium phosphatecement；Mesenchymalstem cell 目前，改善成骨的 “金标准”是 自体的松质骨 移植。近来的研究发现，自体的松质颗粒骨具有 良 1 材料和方法 好的骨诱导活性，而且在骨科手术中易于获得。但 对于某些较大的骨缺损，自体松质骨的用量受到限 1．1 生物材料的体外制备 制。鉴于磷酸钙骨水泥 (calcium phosphatece— 1．1．1 骨髓间充质干细胞的获取、体外培养 ment，CPC)是具有较好的生物降解性的骨植入物 过量麻醉处死6～9日龄Wistar鼠，以75 酒 材料，如将 自体颗粒骨与磷酸钙骨水泥按 比例混合 精浸泡消毒5min，于无菌条件下，取出双侧股骨。 植入骨缺损可能会获得 良好的骨愈合。骨髓间充质 清除骨周软组织后，剪去骨干两端，用 DMEM 培 干细胞 (mesenchymalstem cells，MSCs)是 目前 养液冲洗骨髓于 10ml离心管中。迅速将细胞悬液 倍受关注的具有多向分化潜能的干细胞，在体内和 加入 2倍体积 的淋 巴细胞分离液，离心 20min 体外都可在特定的诱导条件下分化成骨、软骨、脂 (2000r／min)。抽取离心管 中间单核细胞层，以 肪、肌肉、神经、肌腱及韧带等组织。MSCs取材 dHANKs缓冲液冲洗后离心 (1000r／min)，倒掉 方便，可在体外大量扩增，可以与颗粒骨与磷酸钙 缓冲液，加入含体积分数为 20 的胎牛血清 的 骨水