miR-99a在儿童急性髓性白血病及慢性粒细胞性白血病的表达及功能研究.pdfVIP

miR-99a在儿童急性髓性白血病和慢性粒细胞性白血病的表达和功能研究 miR．99a在儿童急性髓性白血病和 慢性粒细胞性白血病的表达和功能研究 专 业：儿科学 硕士生：张丽丹 指导老师：罗学群教授 摘要 个核苷酸，可在转录水平或转录后水平调控基因的表达，其主要功能是miRNA 与靶基因3’端非翻译区(3’Untranslated region，3’．UTR)结合，并通过降解靶 基因或者抑制靶基因翻译来实现转录后的基因沉默。目前已经发现的人类 miRNA有700多个左右，调控基因组中大约1／3的蛋白编码基因，广泛参与细 胞增殖、分化和凋亡等一系列重要生命过程。近来研究表明，大约有50％已注释 的miRNA位于和癌症相关的基因脆性位点及基因组区域中，在癌症中起着原癌 基因或者抑癌基因的作用，而且在许多恶性肿瘤包括白血病中已经鉴定出与疾病 的诊断、发展、治疗反应及预后相关的miRNA表达谱，本研究团队发表的前期 研究工作亦支持这些结果。 白血病在我国儿童的恶性肿瘤中发病率最高，而且儿童与成人白血病在生物 学特性、治疗反应和预后等方面有明显的不同。然而，目前许多实验都基于对成 人白血病的研究，而对儿童白血病相关miRNA的研究较少，很多与儿童急性髓 性白血病(acute myeloid myelogenous 发掘和分析与儿童白血病相关的miRNA，并对其作用和机制进行深入研究，从 非蛋白编码基因的分子水平阐明儿童白血病的本质。 本研究收集了68例儿童AML和12例儿童特发性血小板减少性紫癜(作为 对照组)的骨髓样本，其中18例儿童初发AML和5例对照组样本用miRNA芯 进一步验证miR-99a的表达并分析其功能。另外，亦收集了12例儿童CML骨 髓样本用qRT-PCR方法研究miR-99a的表达并分析其功能。结果如下： miR．99a在儿童急性髓性白血病和慢性粒细胞性白血病的表达和功能研究 例儿童初发AML和5例对照组样本的576个人类成熟miRNA的表达谱进行分 患者中均未见报道。 高表达，并揭示其在不同疾病阶段表达水平不同。qRT-PCR技术显示miR．99a 在所有儿童初发AML中高表达，与基因芯片结果一致，而在91％AMLCR患者 中miR．99a的表达量下降，几乎与对照组的表达相同，在可评估的复发患者中 在所有儿童初发CML患者中显著高表达，而在CR患者中表达量下降。这些结 果高度提示miR-99a起原癌基因的作用，促进儿童AML和CML的发生和发展。 学软件对miR．99a的靶基因进行正向和反向预测，并结合文献检索，预测出可能 MCL．1。并构建靶基因载体，在293T细胞中通过双荧光报告Lipo转染实验先后 光报告电转染实验，结果与双荧光报告Lipo转染实验相符。 (4)对36例儿童AML和3例对照组样本进行WeStemblot分析，结果表明 在对照组和58％的CR患者中CTDSPL蛋白表达较高，而在复发和53％的初发 lOOnM miR-99a 的靶标之一，大部分患者的发病可能与之有关。 Ⅱ miR-99a在儿童急性髓性自血病和慢性粒细胞性白血病的表达和功能研究 的发生和发展。 T砒B2是受其调控的其中两个靶基因。该研究从基因调控水平揭示了儿童AML 和CML的其中一个新致病机制，为将来开展以miRNA作为药靶治疗白血病的 可能性增加了新的理论依据，并为今后进一步探索打下了重要的前期研究基础。 关键词：miR-99a儿童急性髓性白血病儿童慢性粒细胞性白血病 表达和功 能研究 m miR-99a在儿童急性髓性白血病和慢性粒细胞性白血病的表达和功能研究 MiR··99a andfunctionalin expressional study acute leukemi