MiRNA let-7及MMP-2在非小细胞肺癌中的表达及相关性研究.pdfVIP

·中文论著摘要· MiRNA let-7与MMP．2在非小细胞肺癌中的表达及相 关性研究 目 的 分析非小细胞肺癌中MicroRNAlet-7与基质金属蛋白酶2(MMP．2)的表达 及临床意义，探讨其在非小细胞肺癌发生及发展中的作用及二者的相关性。 材料与方法 临床病例资料收集：收集中国医科大学附属第一医院胸外科2010年6月至 2011年3月46例非小细胞肺癌患者手术切除的肺癌组织及其配对的癌旁组织(肿 瘤远端5em以外或手术边缘经病理检查未发现癌细胞)，其中男性20例，女性 取标本已经医院伦理委员会批准，并在每次采集标本前均由患者签署知情同意书。 免疫组织化学染色及结果判定：采用链霉素抗生物素蛋白．过氧化物酶(S．P 法)检测MMP．2蛋白的表达，以PBS代替一抗作为阴性对照组。结果判定：根 据每张切片的阳性细胞比例及着色深浅计分，着色细胞比例1／3以下为1分：1／3．2／3 为2分；2／3以上为3分。着色深度：无着色为0分；浅黄色为1分；棕黄色为2 分；棕褐色为3分。然后根据二者乘积作为每一例的积分，积分4分为阴性；≥ 4分为阳性。 蛋白免疫印迹及结果判定：收集组织(包括肺癌组织及配对的癌旁组织)，匀浆， 放好膜的孵育袋中4C过夜。用TBST按l：10000配制二抗，室温下孵育2小时， ECL发光。测量灰度值，统计分析肺癌组和癌旁组织组中目的条带灰度值与内参 灰度值比值的差异性。 实时定量PCR：收集组织(包括肺癌组织及配对的癌旁组织)使用试剂盒抽取 Ex Premix 总RNA，逆转录合成cDNA。采用反应体系包括SYBR 12．5“l、引 Tap Reference 物各lpl、DNA模板2pl、ROXDye(50x)0．5I-tl、dH2089l。反应条件 算检测let-7和MMP．2相对表达量。 估 量 耋口 禾 MMP．2免疫组化染色的阳性产物为棕黄色颗粒，为浆表达。MMP．2在46例 肺鳞癌和腺癌中阳性表达为30例(65．2％)，在癌旁组织为7例(15．2％)，统计学 床分期及淋巴结转移具有相关性(Z：4．28，P0．05；矿=6．10，P0．05)，而与病 人的年龄、性别及病理分型统计学显示无相关性。 1．2_+692．4，癌旁组织的 蛋白免疫印迹结果显示，肺癌组织相对表达量为351 织(t=10．698，pO．001)。 实时定量PCR示在46例肺鳞癌和腺癌中与配对的癌旁组织比较let-7低表达 l例(67．4％)。统计学显示let-7和MMP．2 的为29例(63．O％)，MMP-2高表达的为3 在非小细胞肺癌和癌旁组织中的差异性表达具有统计学意义。在46例NSCLC组 织中，let．7与MMP．2蛋白表达呈负相关(尸0．05，铲．0．433)。 纲结论J’己 MMP．2及Let．7在肺癌中的表达存在异常，提示二者可能参与了肺癌的发生 发展的过程。MMP：2的异常表达与淋巴结转移及临床病理分期相关，提示MMP．2 在肺癌的发展中有一定促进作用。 let．7的低表达可能引起MMP．2表达的升高， 两者之间可能存在某种协调关系，提示二者在肺癌的预后判断中可能有一定作用。 关键词 微小RNA；let-7；基质金属蛋白酶2：非小细胞肺癌 2 ·英文论著摘要·