PAC-1联合MCP对结肠癌细胞的协同杀伤作用和其分子机制研究.pdfVIP

广州医学院硕士论文 PAC-1 联合 MCP 对结肠癌细胞的协同杀伤作用及其分子机制研究 PAC-1 联合 MCP 对结肠癌细胞的协同杀伤作用 及其分子机制研究 专业： 外科学 研究生：许鹏 导师： 刘海鹰 教授 中文摘要 背景 结肠癌是一种常见的恶性肿瘤, 在我国，近几年结肠癌成为发病率上升最快 的癌症之一。尽管近年来结肠癌的治疗水平有了很大的提高，但是其五年生存率 仍徘徊在 30-66%之间，没有明显提高。化疗是结肠癌治疗的一个重要步骤，但 化疗耐药及其毒副作用却限制了其疗效的进一步提高。原因之一是这些药物的作 用靶点都是位于凋亡级联反应的上游或中游，凋亡级联系统下游的执行蛋白仍有 可能受其他信号通路的影响而抵抗细胞凋亡的执行。因此寻求一种能特异性诱导 肿瘤细胞凋亡且毒副作用小的靶向药物已成为研究热点。 分子靶向治疗就是针对肿瘤发生、发展过程中的关键大分子，包括参与肿瘤 发生、发展过程中的细胞信号传导和其他生物学途径的重要靶点，通过特异性阻 断肿瘤细胞的信号传导，来控制其基因表达和改变生物学行为，或是通过阻断肿 瘤血管生成，从而抑制肿瘤细胞的生长和增殖，发挥抗肿瘤作用。相对于手术、 放疗、化疗三大传统治疗手段，分子靶向治疗具有较好的分子选择性，能高效并 选择性地杀伤肿瘤细胞，减少对正常组织的损伤。 半胱天冬酶原活化复合物-1 （procaspase-activating compound-1 ，PAC-1 ） 是美国伊利诺伊大学 P.J.Hergenrother 教授领导的研究小组通过筛选 25000 多种 物质后发现的一种小分子复合物，它能高效活化半胱天冬酶原-3 （procaspase-3 ） 转化为半胱天冬酶（caspase-3 ），而后者是细胞凋亡通路下游的凋亡执行关键蛋 白，进而诱导多种肿瘤细胞产生凋亡。 低分子柑桔果胶是从天然果胶产物中提取得到的一种以半乳糖为主要成份 1 广州医学院硕士论文 PAC-1 联合 MCP 对结肠癌细胞的协同杀伤作用及其分子机制研究 的多糖，研究发现低分子柑桔果胶是体内半乳糖凝集素-3(Galectin-3)配体的竞争 性抑制剂，它与 Bcl-2 有明显的序列相似性，在羧基端都含有 NWGR 基序，而 该基序是 Bcl-2 抑制凋亡所必需的。Bcl-2 抑制凋亡的癌基因，作用于内源性细 胞凋亡信号通路。 虽然既往的研究已经证实 PAC-1 和低分子柑桔果胶可以通过作用于不同的 细胞凋亡的关键蛋白或关键途径发挥抗肿瘤作用，但两者联合应用是否能够具有 更强的促进凋亡、抗肿瘤作用，它们对结肠癌细胞的作用及其机理如何，目前国 内外尚未见文献报道。根据：caspase-3 是凋亡通路下游的执行蛋白，Bcl-2 通过 调节内源性细胞凋亡通路上游的 Cyt-c 的释放来调控细胞凋亡，我们推测PAC-1 联合低分子柑桔果胶可以通过直接活化 caspase-3 诱导细胞凋亡及抑制 Bcl-2 的 活性从而提高内源性细胞凋亡通路活性两方面来提高对肿瘤细胞的杀伤作用。 实验目的 本实验采用 PAC-1 和低分子柑桔果胶，通过体外实验进行以下研究：1）PAC-1 和低分子柑桔果胶对人结肠癌细胞增殖及凋亡的影响，进一步从 caspase-3、8、 9、PARP 及 bcl-2 的表达和细胞周期深入探讨其抗肿瘤的机制；2 ）明确 PAC-1 联合低分子柑桔果胶对人结肠癌细胞增殖及凋亡的影响并探索其内在机制。 方法 1、细胞株：人结肠癌细胞株 SW116、HCT116 、HT-29 、SW620 和 SW480。 2 、MTT 比色法评价不同浓度PAC-1/低分子柑桔果胶处理上述细胞 72h 后对上述 人结肠癌细胞的体外增殖抑制作用，并计算 PAC-1/低分子柑桔果胶对上述人 结肠癌细胞的 IC50 ，选出对PAC-1 敏感和不敏感的细胞各一株。 3、MTT 比色法评价 IC25、IC50 、IC75 剂量的 PAC-1