PTEN基因抗白血病作用和其机制的研究.pdf

中文摘要 PTEN基因抗白血病作用及其机制的研究 摘 要 andtensin deletedonchromosometen hemology gene，PTEN)是磷酸酶家族 中发现的首个抑癌基因，PTEN蛋白具有蛋白磷酸酶和脂质磷酸酶双重活 能在于调控细胞的增殖与凋亡。其蛋白磷酸酶活性可以抑制丝裂原活化蛋 附。PTEN通过上述多种信号传导通路影响细胞生长、分化、黏附及细胞 周期进程，抑制肿瘤细胞增殖、侵袭、转移，并促进肿瘤细胞凋亡。研究 发现在多种实体瘤中存在PTEN基因的突变、等位基因的缺失或低表达， 从而影响其肿瘤抑制功能，并与部分肿瘤的预后不良密切相关。近年来 PTEN在造血系统肿瘤，如白血病发病中的作用逐渐受到重视，研究表明 PTEN基因在白血病中存在不同程度的缺失、低表达、甲基化，而突变罕 见。造血细胞PTEN基因突变或缺失的小鼠最初可以出现类似于人类骨髓 增殖性疾病(MPD)表现，随后转化为急性髓系或淋巴细胞白血病，把PTEN 基因突变或缺失的小鼠造血祖细胞移植到SCID鼠后，受体鼠亦发生白血 病，并伴有白血病细胞髓外浸润。同时PTEN基因的表达水平对区分白血 病干细胞和正常造血干细胞发挥了关键作用。国内外研究表明PTEN基因 的异常可能参与了白血病的发病、多药耐药、血管新生及髓外浸润。 PTEN基因抑制肿瘤细胞增殖，促进肿瘤细胞凋亡的作用在多种实体 肿瘤细胞中已经得到证实，而在造血系统肿瘤如白血病中的作用及其机制 尚不完全清楚。 K562细胞系为人慢性粒细胞白血病急性红白血病变细胞系，具有较 生型PTEN基因进行转染提供了条件。因此我们将腺病毒介导的PTEN 基因转染人白血病原代细胞及K562细胞系，观察野生型PTEN对白血病 细胞增殖、凋亡、侵袭、细胞周期进程、多药耐药及血管新生的影响，并 中文摘要 检测其可能的作用机制，为基因治疗白血病提供理论依据。研究分以下三 部分： 第一部分腺病毒介导的野生型PTEN基因对人慢性粒细胞白血病 细胞系K562及原代白血病细胞增殖、凋亡、细胞周期的影响 目的探讨肿瘤抑制基因PTEN对人原代白血病细胞及K562细胞系 增殖、凋亡及细胞周期的影响，并对其可能的作用机制进行初步探讨。 方法 将携带有野生型PTEN及绿色荧光蛋白的腺病毒(Ad． 细胞系。MTT检测细胞生长曲线；流式细胞仪检测腺病毒转染细胞的转 染效率、细胞凋亡率和细胞周期分布；光镜下检测细胞形态变化，DNA P27¨叫mRNA水平变化，Western 结果 1 当MOI为200时，转染第三天用流式细胞仪检测腺病毒转染K562 细胞效率最高为81．2+5．4％。通过计数绿色荧光细胞数量检测转染原代细 胞效率较低，选取了5例原代白血病细胞，平均转染效率为7．32+6．41％。 2 当MOI为200时在转染第3天PTENmRNA及蛋白表达水平达 及蛋白(O．086+0．021)表达水平，均P0．01。 3 增殖受抑，对转染的5例原代细胞增殖抑制率为33．8-+-10．4％。 组细胞凋亡率为22．4士2．1 组的0．2士0．02％，均P0．05。 中文摘要 胞呈圆形或椭圆形，体积较大，染色质疏松；转染Ad．PTEN．GFP组部分 光染色显示正常细胞核Hoechst着色的形态呈圆形，淡蓝色；而凋亡细胞 (6．2％士O．87％)，均P0．01。 5 琼脂糖凝胶电泳出现大小为180至200bp及其倍数的梯状条带，片断之间 呈一定间隔，这是DNA在核小体间成倍断裂的结果，Ad．GFP组及未转 染组细胞未出现DNA降解现象。 6细胞周期显示以MOI=200 渐增加，处于G2／M期细胞比例逐渐减少，细胞周期阻滞在G0／G1。 7 3d后P．Akt表达 水平明显减低(尸O．01)。 8 1+0．024)矛I 03+0．024)活性，