PTEN活性的抑制联合头部浅低温对大鼠全脑缺血再灌注损伤的作用.pdfVIP

中文摘要 PTEN活性的抑制联合头部浅低温对大鼠 全脑缺血再灌注损伤的影响 摘 要 目的：应用改良的四血管阻断法制备Wistar大鼠全脑缺血再灌注模 andtensin 型，在全脑缺血前腹腔注射PTEN(thephosphates homologue deletedonchromosome 10，第10号染色体缺失的磷酸酶和张力蛋白同源等 位基因)的抑制剂bpv(pic)抑制其活性，并采用鼻咽腔降温法实施头部浅低 量和超氧化物歧化酶(SOD)的活性，研究PTEN活性的抑制、头部浅低温 以及PTEN活性的抑制联合头部浅低温对大鼠全脑缺血再灌注损伤的影 响，并探讨对其影响的可能机制。 方法： 1实验分组及动物模型制备 实验动物中心提供。采用随机数字表法将实验大鼠随机分为5组(n=12)： 组)。应用改良的Pulsinelli四血管阻断法制备大鼠全脑缺血再灌注模型， 全脑缺血时间为15min，再灌注8h。大鼠称重后腹腔注射10％水合氯醛 (350mg／kg)，麻醉后固定在实验台上，在颈后正中第一、二颈椎处切开 颈后正中皮肤，分离肌层并暴露双侧翼状孔外口，烧灼双侧的椎动脉使其 永久闭塞。24h以后给大鼠再次麻醉，进行气管插管并吸入氧气。尾静脉 置管后，静脉泵入乳酸钠林格氏液。颈前正中切开皮肤，分离双侧颈总动 脉，穿线备用。大鼠立体固定后，监测脑电图、心电图和直肠温度。在大 鼠躯干下放置小热水袋，躯干上空放置60瓦白炽灯，通过更换热水袋并 调节躯干与白炽灯的高度使实验大鼠的直肠温始终维持在(37．0d：0．5)℃。 实验中的S组大鼠仅暴露翼状孔外口，并分离颈总动脉，但不烧闭双侧椎 动脉，不夹闭双侧颈总动脉，观察8小时。B组制备大鼠全脑缺血再灌注 中文摘要 次，间隔3小时，最后一次给药后20min夹闭双侧颈总动脉。IR组制备 大鼠全脑缺血再灌注模型，并在全脑缺血前腹腔注射与bpv(pic)等容量的 0．9％氯化钠溶液。MH组和MB组均制备全脑缺血再灌注模型，气管插管 后在咽喉下放入吸痰管和棉球，防止误吸。用微型颅骨钻在右侧海马CAl 2mm的圆孔，置入微型温度探头监测海马温度，在全脑缺血前经双侧鼻 腔置入20G硅胶管，深度为5mm，灌注5。C0．9％氯化钠溶液，实施头部浅 闭双侧颈总动脉15min，低温维持1h后自然复温。实验中直肠温始终维 同B组)，并在全脑缺血前实施头部浅低温，MH组除实施头部浅低温外， 在全脑缺血前腹腔注射与bpv(pic)等容量的0．9％氯化钠溶液。 2标本的采集及检测方法 达 假手术组观察8h，其它组再灌注8h后，每组随机取6只大鼠，麻醉后， 用4％多聚甲醛溶液经心灌流固定，取脑后放入4％多聚甲醛溶液中进行后 固定，置4。C冰箱中保存，用于免疫组织化学染色。 2．2脑组织中S100B蛋白、MDA含量和SOD活性的检测 每组取另外6只大鼠，麻醉后，快速断头取出脑组织，放入冷冻管冻 存于液氮中，然后移入．70℃的冰箱中保存。用ELISA法测定S100B蛋白的 含量，用硫代巴比妥酸法测定MDA的含量，用黄嘌呤氧化酶法测定SOD 的活性，按试剂盒的具体说明进行操作。 结果： 1五组问大鼠的体重比较差异无统计学意义(尸O．05)。 2海马CAl区P—PTEN蛋白表达(IHS)的比较 P．PTEN蛋白表达均增多，差异有统计学意义(氏O．05)。与B组或与MH 组相比较，MB组P．PTEN蛋白表达均增加，差异均有统计学意义(尸O．05)。 中文摘要 S组、B组和MH组三组间两两比较差异均无统计学意义(胗O．05)。 与S组相比较，其它四组Bax蛋白表达均增多；B组、MH组和MB组 Bcl．2／BaxH二值均增高，差异均有统计学意义(氏0．05)。与B组相比较， 学意义(P0．05)。其余组间比较差异均无统计学意义(PO．05)。 4脑组织中S100B蛋白的比较 量均减少，差异有统计学意义(尸0．05)。与B组或与MH组相比较，MB 1 组S 组和MH组的比较差异均无统计学意义(尸O．05)。