TESTIN基因在子宫内膜癌病程中的作用和其机制研究.pdfVIP

中文摘要 TESTIN 基因在子宫内膜癌进展中的作用及其机制研究 II TESTIN 基因在子宫内膜癌病程中的作用及其机制研究 中文摘要 TESTIN 基因在子宫内膜癌病程中的作用及其机制研究 中文摘要 第一部分 TESTIN 基因在子宫内膜癌中的表达水平 目的：探讨子宫内膜癌中 TESTIN 基因的表达水平，为子宫内膜癌的早期诊断提供依据。 方法：收集 68 例子宫内膜癌患者的子宫内膜癌组织 68 例及相应的癌旁组织 68 例，其中子 宫内膜样腺癌 60 例，子宫浆液性乳头状腺癌 8 例。免疫组化法检测子宫内膜癌组织及其癌旁正 常组织中 TESTIN 基因的蛋白表达水平并对 TESTIN 基因表达与临床参数之间的关系进行统计学分 析。采用甲基化特异性 PCR 检测子宫内膜癌组织、细胞中 TESTIN 基因启动子的甲基化状态，分 析其与 TESTIN 表达水平之间的相关性。 结果：子宫内膜癌的癌旁正常组织中 TESTIN 蛋白呈阳性表达，而绝大部分(52／68)的子宫 内膜癌组织中TESTIN 蛋白表达显著下降（p0.O1)。进一步分析显示：子宫内膜样腺癌组中TESTIN 2 蛋白表达水平下降率较浆液性乳头状腺癌组明显升高 (χ =13.34，p=0.001)。根据 MSP 的结果， 44.1% (30/68)的子宫内膜癌中 TESNTIN 启动子为高甲基化状态，而在正常内膜组织中仅为 3.6% (1/28)，p0.001)。统计学分析显示 TESNTIN 启动子高甲基化与淋巴结转移(p=0.03)显著相关。 同时，TESTIN 表达水平下降与其高甲基化状态相关 (p=0.021)。甲基化处理可恢复AN3CA 细胞内 TESTIN 表达。 结论：TESTIN 基因在子宫内膜癌中表达显著下降，启动子区域的高甲基化是 TESTIN 基因在 子宫内膜癌中表达缺失的主要原因。 关键词：TESTIN 基因，抑癌基因，子宫内膜癌，甲基化 I 中文摘要 TESTIN 基因在子宫内膜癌病程中的作用及其机制研究 第二部分 TESTIN 在子宫内膜癌中的作用机制 目的：探讨 TESTIN 甲基化在子宫内膜癌中的作用及其分子机制。 方法：分别构建 TESTIN 过表达质粒 pcDNA3.1-TESTIN 和干扰质粒 shRNA-TESTIN；将上述两 种质粒转染子宫内膜癌细胞并构建稳定的转染细胞株，应用实时 PCR 方法和 western blot 方法 检测转染前后 TESTIN 基因的表达。应用 MTT 法、克隆形成实验、Transwell 实验、实时 PCR 和 western blot 等方法检测 TESTIN 对子宫内膜癌细胞的生长、克隆形成和侵袭能力的影响，光学 显微镜下观察子宫内膜癌细胞的形态学变化，实时 PCR 和 western blot 方法检测与 EMT 相关的 E-钙粘连蛋白、Snail，波蛋白和 N-钙粘连蛋白的 mRNA 和蛋白表达水平的变化。分别使用 TESTIN 稳定过表达和干扰的子宫内膜癌细胞株建立建立子宫内膜癌裸鼠模型，观察 TESTIN 对肿瘤生长 的抑制作用，验证TESTIN 对 EMT 过程的调控。 结果：在 AN3CA 细胞中，TESTIN 过表达可明显抑制细胞的生长、克隆形成和侵袭能力；同时， TESTIN 过表达后诱导 AN3CA 细胞出现上皮性转变，上皮性标志物 E-cadherin 的表达水平明显上 升，而间质性标志物 Snail，N-cadherin，vimentin 的表达则被显著抑制；相反地，在 TESTIN 敲低的 Ishikawa 细胞中，细胞的生长、克隆形成和侵袭能力得到增强；同时，干扰 TESTIN 基因 后 Ishikawa 细胞 由上皮细胞形态向间质细胞形态方向转化 ，作