TLR2及TLR4表达及其信号转导在新生儿感染控制中的作用.pdfVIP

TLR2 和TLR4 表达及其信号转导在新生儿感染控制中的作用 中文摘要 TLR2 和TLR4 表达及其信号转导在新生儿 感染控制中的作用 中文摘要 目的：新生儿对细菌、病毒和真菌等引起的感染高度易感，感染性疾病也是导致 新生儿死亡的主要病因之一。单核细胞是固有免疫系统中主要的效应细胞，在识别、 抗原呈递以及吞噬清除病原体方面发挥着至关重要的作用。TLRs （Toll-like receptors ） 是单核细胞上表达的一类主要的模式识别受体，单核细胞依赖TLRs 及其下游信号网 络参与到抗感染免疫应答中。TLR2 和TLR4 不但可识别外源的病原体，还可识别内 源性物质及降解物 （如细菌脂多糖、肽聚糖以及热休克蛋白等），是TLRs 中较为重 要的两种。因此，我们将以TLR2 和TLR4 为切入点，研究新生儿单核细胞上TLR2、 TLR4 的表达情况及其下游信号转导的特点，为免疫治疗新生儿感染提供新思路。 方法：收集29 例新生儿（37 周-42 周）的脐血以及24 例健康成人外周血，采用 流式细胞术分析单核细胞表面TLR2 和TLR4 的表达水平；取新生儿脐血及健康成人 外周血各50μl，分别给予PGN （1μg/ml ）或LPS （10ng/ml ）刺激10min，以流式细 胞术分析单核细胞中p38 以及p65 的活化水平；另取新生儿脐血和成人外周血各50μl， 分别用450μl 含PGN(1μg/ml )或LPS(10ng/ml) 的RPMI1640 培养基刺激4h，收集培养 上清，采用CBA 法（Cytometric Beads Array ）检测其中细胞因子IL-1、IL-6 的表达 水平。 结果：1. 新生儿单核细胞表面 TLR2 的平均荧光强度（3.45 ±0.14 ）与成人 （3.86±0.19 ）相比，未见明显统计学差异（P=0.08 ）；而新生儿单核细胞表面TLR4 的平均荧光强度（1.36±0.07 ）与成人 （1.89±0.12 ）相比，差异具有统计学意义 （P0.01) 。同样，新生儿单核细胞TLR2 阳性细胞百分比（85.47 ±1.93）与成人（85.86 ±1.46）相比，亦未见明显统计学差异（P=0.88 ）；新生儿单核细胞表面TLR4 阳性 细胞百分比（43.98 ±2.00 ）与成人（53.82 ±2.47 ）相比，差异具有统计学意义（P0.01) 。 2. PGN （1g/ml ）刺激后，新生儿p38 活化水平为2.80 ±0.32，明显低于成人（5.72 I 中文摘要 TLR2 和TLR4 表达及其信号转导在新生儿感染控制中的作用 ±0.23 ），差异具有统计学意义（P0.01 ）；新生儿p65 活化水平为 1.10±0.02，与 成人（1.13±0.02 ）相比，未见明显统计学差异。LPS （10ng/ml ）刺激后，新生儿p38 活化水平为2.43 ±0.14，明显低于成人（3.82 ±0.24 ），差异具有统计学意义（P0.05 ）； 经LPS 刺激后，新生儿p65 活化水平为1.25±0.02，明显低于成人1.56±0.04，差异 具有统计学意义 （P0.01 ）。3. PGN （1g/ml ）刺激后，新生儿细胞因子IL-1 的释放 水平为 243.74 ±15.65pg/ml，较成人组( 344.30 ±26.53pg/ml ）明显降低，差异具有统 计学意义（P0.05 ）；PGN 刺激后，新生儿IL-6 的释放水平为1791.82±341.71pg/ml ， 成人 IL-6 的释放水平为 1698.66 ±265.00pg/ml ，两者相比，无明显统计学差异 （P=0.83 ）。LPS 刺激后，新生儿细胞因子IL-1 的释放水平为 46.56 ±2.23pg/ml，与 成人组(73.24 ±7.90pg/ml ）相比，同样具有显著统计学差异（P0.05 ）；LPS 刺激后， 新生儿 IL-6 的释放水平为 847.51 ±34.88pg/ml ，成人 IL-6 的释放水平为 947.45 ± 70.64pg/ml，两