TiM-1信号通路在小鼠实验性结肠炎中的影响.pdfVIP

摘要 摘要 背景与目的： 炎症性肠病(IBD)的发病机制和病因非常复杂，我们的前期研究和文献报 道发现TLR信号通路和Th免疫反应的异常在其中起着十分重要的作用，并且 这些异常在不同类型的IBD(CD和UC)中有所不同，但是其发生机制尚不明 确。为何不同类型的IBD会出现不同的Th优势反应，它们的调控机制不清楚。 Tim．1信号通路是最新发现的调节Th免疫反应的核心环节，并且与TLR信号通 路有着密切的关系。然而Tim．1信号通路在IBD发生发展中的作用，及它与IBD 的Th免疫反应和TLR信号通路变化的关系国内外尚未见报道。为此，本文研 究不同类型的小鼠实验性结肠炎(分别类似人类的UC和CD的动物模型)Tim．1 信号通路的变化及其与调节性T细胞(Treg)和TLR信号通路的关系，并以此 为干预靶点，分别观察Tim．1信号通路对不同类型小鼠实验性结肠炎的Treg细 胞和TLR信号通路的影响，及其与疾病的的关系，从这一新的角度来探讨IBD 的发病机制，为IBD的防治提供新的靶点和方向。 方法： 1．实验分组 (1)Tim．1抗体未处理小鼠组；(2)Tim．1抗体预处理小鼠组； 每组内再分为：①正常对照组；②DSS模型组；③TNBs模型组。 2．小鼠实验性结肠炎模型的建立 (1)DSS诱导小鼠实验性结肠炎模型的建立：BALB／c小鼠自由饮用5％DSS 溶液7天，建立小鼠急性结肠炎模型。 (2)TNBS诱导小鼠实验性结肠炎模型的建立：BALB／C小鼠禁食、不禁饮 24小时后，乙醚麻醉，用3．5F导管从肛门插入肠道深约5．5em处，灌注TNBS／50％ TNBS的50％乙醇溶液)，之后将小鼠倒置60秒。从造 乙醇溶液roost(含2mg 模第一天开始，每日观察并记录各组小鼠体重、大便性状，7天后处死小鼠。 抗体消除非特异性吸附后，再给予25099抗一Tim·lAb腹腔注射，对照小鼠给予 同等剂量的lgG2a。 摘要 3．观察以下各项指标： (1)各组小鼠每天的体重变化、结肠炎疾病活动指数(DAI积分)； f2)Nt艮观察小鼠结肠大体形态改变，HE染色观察小鼠结肠炎病理组织学损 伤程度； blot法检N (3)Western 白的表达； p65蛋白的表达。 结果： 1．各组小鼠体重变化及DAI积分 实验第5、7天，各模型组小鼠体重下降百分比均显著高于相应的对照组 组(P0．01)。小鼠体重变化在Tim．1抗体未处理组和预处理组之间有差异，仅实 验第7天DSS组问差异有统计学意义(P0．05)，其余组问差异无统计学意义 (P0．05)。 在实验第5、7天，无论是Tim．1抗体未处理组还是预处理组中，模型组小 积分均高于未处理组，但都无统计学意义(PO．05)。 2．小鼠肠黏膜大体形态和结肠组织病理变化 (1)无论是Tim一1抗体未处理组还是预处理组，对照组小鼠结肠黏膜呈淡红 色、光滑完整，未见充血、水肿、糜烂、溃疡，DSS组和TNBS组小鼠结肠黏． 膜可见充血、水肿、糜烂。 (2)无论是在Tim．1抗体未处理组还是预处理组，模型组小鼠的结肠炎症程 Tim．1抗体预处理的各组 度、病变深度、隐窝破坏均显著高于对照组(P0．01)o 小鼠病理组织学损伤程度均高于未处理组，但只有DSS组间差异有统计学意义 (P0．05)。 3．小鼠结肠组织中Foxp3的表达 (1)免疫印迹检测发现，在Tim．1抗体未处理组中，模型组Foxp3蛋白的表 达低于对照组，但无统计学意义(P0．05)。在Tim．1抗体预处理组中，对照组 体未处理组和预处理组之间的差异无统计学意义(P0．05)。 摘要 (2)免疫组化染色发现，无论是在Tim．1抗体未处理组还是预处理组中，对 型组Foxp3阳性细胞数均低于未处理小鼠，但只有DSS组间差异有统计学意义 (P0．05)。 4．小鼠结肠组织中SIGIRR的表达 (1)免疫印迹检测发现，在Tim．1抗体未处理