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Tie2 信号系统激活对血管内皮细胞的保护作用 中文摘要 Tie2 信号系统激活对血管内皮细胞的保护作用 中文摘要 研究背景：微血管内皮损伤是急性肾损伤和慢性肾脏疾病共同的病理改变，贯穿 于它们的发生、发展过程。与肾小管上皮细胞相比，肾微血管内皮细胞缺乏有效的再 生能力，当肾功能恢复到正常水平以后，肾周微血管密度的降低或丢失的病变仍将长 期存在，最终将导致慢性肾小管间质纤维化。Tie2 信号系统被认为在血管内皮的保护 方面起着重要的作用，研究中该信号系统的激活多应用Ang-1，但也有研究显示Ang-1 促进急性肾损伤，炎症细胞浸润，后期促进肾纤维化。因而我们集中研究 Tie2 信号 对血管内皮的保护作用。 目的：本研究建立脂多糖诱导的血管内皮细胞损伤，探讨Tie2 信号系统激活对 血管内皮细胞是否具有保护作用。为后期进一步研究提供依据。 方法：第一部分 离体培养人脐静脉血管内皮细胞HUVEC ，以4 ×104 接种于96 孔板，200ul/孔。分别以浓度0ug/ml，0.125 ug/ml，0.25 ug/ml，0.5 ug/ml，1 ug/ml， 2 ug/ml ，5 ug/ml，10 ug/ml 的LPS 刺激损伤细胞。孵育24 小时，采用cck8 法测定细 胞活性。根据结果选择适宜的LPS 浓度，建立细胞损伤模型。第二部分 根据第一部 分结果选择LPS 刺激浓度为 10 ug/ml。细胞分为三组：正常对照组；LPS 组；LPS+Tie2 单抗组。应用Elisa 技术检测孵育24 小时后各组细胞上清sVCAM-1 的表达水平。应 用PCR 技术检测孵育6h 后各组细胞VCAM-1 mRNA 的水平变化。应用PCR 技术检 测孵育6h 后各组细胞凋亡相关基因Bax 、Bcl-2 的水平变化。应用WESTERN BLOT 技术检测孵育24 、48 小时后，各组细胞α -SMA 的表达水平的变化。 结果：第一部分 cck8 结果显示，内皮细胞被不同浓度LPS 损伤刺激后，各浓度 LPS 均对细胞增殖活性产生抑制作用，与正常细胞比较差异有统计学意义（P0.05 ）。 第二部分 采用10 ug/ml LPS 刺激损伤细胞后，LPS 组细胞上清sVCAM-1 分泌 量与VCAM-1 mRNA 较空白对照组明显升高（P0.05 ）。加入Tie2 激发单抗后水平 下降（P0.05 ）。孵育6h 后，LPS 组细胞BaxmRNA 与BaxmRNA/Bcl-2mRNA 较空 I 中文摘要 Tie2 信号系统激活对血管内皮细胞的保护作用 白对照组明显升高(P0.05) 。加入 Tie2 激发单抗后水平下降（P0.05 ）。各组Bcl-2 基因水平无明显差异（P0.05 ）。孵育24h 及48h 后，LPS 组细胞α -SMA 水平较空 白对照组明显升高(P0.05) 。加入Tie2 激发单抗后水平下降（P0.05 ）。 结论: 1.LPS 可引起血管内皮细胞不同程度损伤，Bax 基因表达增加提示细胞凋 亡增加，VCAM-1 表达增加提示细胞发生炎症反应，α -SMA 水平升高，提示细胞发 生了转分化。2.加入Tie2 激发单抗后，细胞VCAM-1 蛋白与基因水平低表达、Bax/Bcl-2 下降说明 Tie2 信号系统激活对血管内皮细胞具有抗炎、抗凋亡的作用。3.加入 Tie2 激发单抗后，细胞α -SMA 表达水平下降，说明Tie2 激发单抗可以抑制细胞向肌成纤 维细胞方向转分化。 关键词：Tie2 信号；微血管内皮细胞损伤；炎症反应；凋亡；Endo-MT 作 者:王 震 指导老师:李晓忠 II Activation of Tie2 signaling pathway in vasculature protection