uPAPAI-1在非酒精性脂肪性肝纤维化进展中作用和机制的研究.pdfVIP

中文摘要 uPA／PAI．1在非酒精性脂肪性肝纤维化进展中 作用及机制的研究 摘 要 liver 目的：非酒精性脂肪性肝病(non．alcoholic fatry 是和遗传易感密切相关的代谢应激性肝脏损伤。随着人们膳食结构及生活 方式的改变，全球NAFLD患病率呈现上升趋势，其疾病谱包括单纯性脂 肪肝、非酒精性脂肪性肝炎／肝纤维化、肝硬化、肝细胞癌。非酒精性脂 肪性肝纤维化是疾病进展至肝硬化、肝癌和终末期肝病必经的病理阶段， 肝纤维化病变能否控制或逆转在很大程度上影响患者的预后。目前临床缺 乏高效、无明显毒副作用的抗肝纤维化西药，中药因其多组分、多途径、 多靶点抗肝纤维化作用而日益引起学者关注。已有研究表明，丹参、桃仁、 绞股兰等中药均有一定的抗肝纤维作用，由以上三味中药为主组成的扶正 化瘀复方具有良好的抗慢性乙型肝炎肝纤维化的作用，但该中药复方对非 酒精性脂肪性肝纤维化的作用及作用机制尚不明确。uPA／PAI．1是调节细 胞外基质降解的主要酶系，它们的表达失衡直接影响细胞外基质沉积，进 and 而影响肝纤维化的发生与发展。本研究以蛋氨酸．胆碱缺乏(methionine choline 正化瘀复方或联合血红素氧化酶．1(heme 制剂进行干预实验，旨在探明uPA／PAI．1在非酒精性脂肪性肝纤维化进展 用机制。 实验动物研究所)，所有小鼠普通饲料喂养l周后随机分为7组，以MCD 饮食喂养8周建立非酒精性脂肪性肝纤维化模型，同时分别应用扶正化瘀 复方、HO．1激动剂血晶素、抑制剂锌原卟啉、扶正化瘀复方联合HO．1 激动剂或抑制剂进行干预实验，以蛋氨酸．胆碱充足饮食设立对照组。喂 养8周造模结束后，深度麻醉下取血，4C离心分离血清，留取部分肝组 织以4％中性甲醛固定，备做病理切片，其余肝组织用液氮快速冷冻后置 于．800C冰箱保存，备提取蛋白、mRNA。 中文摘要 l观察实验小鼠一般情况：处死小鼠前观察其精神状态、毛发，并称 量体重及肝湿重，计算肝指数(肝湿重／体重×100％)。 2血清丙氨酸氨基转移酶(alanine 酸氨基转移酶(aspartate AU 5400全自动生化分析仪酶法测定。 and eosin，HE)染色观 3肝组织切片采用苏木精。伊红(haematoxylin 察肝细胞脂肪变、炎症程度；Masson染色观察肝纤维化程度。 4肝组织纤维化相关基因检测：采用逆转录聚合酶链反应(reverse chain reaction，RT-PCR)、Westernblot及免疫组织 transcriptionpolymerase factor growthbetal， 化学检测肝组织HO．1、转化生长因子131(transforming TGF一131)、尿激酶型纤溶酶原激活物(urokinaseactivator, typeplasminogen activator uPA)、纤溶酶原激活物抑制剂．1(plasminogen 基质金属蛋白酶