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UBE2Q1 的异常表达与肝细胞肝癌发生发展的相关性研究 中文摘要 UBE2Q1 的异常表达与肝细胞肝癌发生 发展的相关性研究 中文摘要 目 的： 肝细胞肝癌（hepatocellular carcinoma, HCC ）是世界上最常见的癌症之一。有研究报道，泛 素蛋白酶体系统（ubiquitin-proteasome system,UPS ）参与了蛋白质降解的调控，在HCC 以及其他 恶性肿瘤的病理生理学过程中扮演着关键角色。泛素接合酶 E2Q1 （ubiquitin-conjugating enzyme E2Q1, UBE2Q1 ）作为一种E2 泛素接合酶类，可能参与了癌症相关蛋白的调控。本研究旨在分析 UBE2Q1 在 HCC 中的表达情况及其与HCC 患者预后的关系，并进一步探讨 UBE2Q1 的异常表达 在 HCC 发生发展过程中的意义。 方 法： 1. 从组织学角度研究，首先通过 Western blot 方法，检测在 8 对新鲜 HCC 及其对应的癌旁 组织中 UBE2Q1 蛋白的表达情况；然后，运用免疫组化方法检测 86 例 HCC 组织标本中 UBE2Q1 和增殖指标 Ki-67 的表达情况，并采用统计学方法分析UBE2Q1 、Ki-67 的表达情况与HCC 癌患 者的性别、年龄、肿瘤体积大小、组织学分级以及肿瘤转移等临床病理因素之间的相关性。通过 Kaplan-Meier 法分析 UBE2Q1 的表达与HCC 患者生存率之间的相关性；运用单因素和 Cox 危险 比例模型多因素分析进一步探究UBE2Q1 的表达与肝细胞肝癌患者预后之间的关系。 2. 从细胞学角度研究，选取高表达 UBE2Q1 的BEL-7404 、HepG2 细胞株作为研究对象， 血清饥饿释放同步化处理后运用 Western blot 方法检测 UBE2Q1 蛋白表达水平变化，探究其在肿 瘤细胞增殖过程中的潜在作用。 3. 从分子生物学角度研究，通过小干扰RNA 的方式下调BEL-7404 、HepG2 细胞中UBE2Q1 的内源性表达，然后采用 CCK-8、细胞流式分析等方法检测 UBE2Q1 表达的下调对细胞增殖以 及细胞周期的影响。 III 中文摘要 UBE2Q1 的异常表达与肝细胞肝癌发生发展的相关性研究 结 果： 1. 免疫组化及 Western blot 法检测均显示，UBE2Q1 在 HCC 组织中的表达明显高于相对应的癌 旁肝组织。统计学分析提示 UBE2Q1 的表达强度与 HCC 组织学分级（P 0.001 ）之间的关系有 统计学意义，相关性分析表明 UBE2Q1 与 Ki-67 表达呈正相关 （r= 0.639 ，P 0.01 ）；Kaplan-Meier 分析显示 UBE2Q1 在 HCC 中的高表达与患者总生存率的降低显著相关（P=0.001 ）；单因素分析 表明 UBE2Q1 与 HCC 患者的不良预后有关 （P 0.001 ）；Cox 比例风险模型分析显示UBE2Q1 可做为 HCC 患者预后的一种独立指标（P= 0.002 ）。 2. 通过血清饥饿的方式使 BEL-7404 、HepG2 细胞生长周期停滞，血清释放后刺激 BEL-7404 、 HepG2 细胞增殖；Western blot 结果显示 UBE2Q1 ﹑PCNA 蛋白随着细胞周期的进展表达增加， 而 p53 、p21 蛋的白表达却下降。 3. siRNA 分析显示，UBE2Q1 表达的下调可引起 BEL-7404 、HepG2 细胞增殖水平的下降及其 细胞周期的停滞。 结 论： 1. UBE2Q1 在 HCC 中高表达，并且可作为HCC 患者一种独立的预后指标。UBE2Q1 的高表达 提示 HCC 患者的预后不良。上述结果均说明 UBE2Q1 可能与 HCC 的发生发展有关。 2. UBE2Q1 的表达在血清饥饿的 BEL-7404 、HepG2 细胞中逐渐增加，提示 UBE2Q1 与 HCC 细胞的增殖过程相关。siRNA 干