T细胞来源Exosomes调节妊娠丢失孕鼠外周NK细胞功能诱导母胎免疫耐受的实验探究.pdfVIP

lItll 目 录 中文摘要……………………………………………………………………1 英文摘要……………………………………………………………………5 英文缩写……………………………………………………………………1O 导母胎免疫耐受的实验研究 前言……………………………………………………………………1日IJ舌……………………………………………………………………l11 材料与方法……………………………………………………………12 耋口7K……………………………………………………………………lO结果……………………………………………………………………16 附图……………………………………………………………………l8 附表……………………………………………………………………26 讨论……………………………………………………………………．28 结j沧……………………………………………………………………33 参考文献………………………………………………………………34 综述蜕膜NK细胞调节正常妊娠的机制研究进展……………………38 致谢…………………………………………………………………………54 个人简历……………………………………………………………………55 万方数据 中文摘要 诱导母胎免疫耐受的实验研究 摘 要 目的：不明原因反复妊娠丢失(URSA)严重威胁孕妇身心健康，而 临床预防治疗URSA的方法尚不完善。目前国内外研究多采用父方淋巴 细胞过继免疫诱导受孕母体对胚胎的有效免疫耐受治疗URSA，但此种方 法尚存在细胞制备的规范程度不高、各实验室疗效不稳定等不足，限制了 在临床上的推广应用。T细胞在生长增殖过程中可分泌释放一种称为 Exosomes的膜性微囊结构，前期实验动物研究表明其在改善妊娠丢失孕 鼠妊娠结局方面能够产生比细胞治疗更好的效果，并可以克服淋巴细胞免 疫治疗的局限性。本研究采用流产实验动物模型，以分析T细胞来源 Exosomes过继转输对妊娠丢失孕鼠胚胎发育、外周NK细胞的影响，旨 在探讨非细胞过继免疫诱导母胎免疫耐受的机制，为反复妊娠丢失的免疫 治疗开辟新思路。 方法： 无菌解剖取脾，获得单个细胞悬液后经刀豆蛋白A(ConA)刺激诱导72h， 采用蔗糖密度梯度超速离心联合超滤方法获取exosomes。 2妊娠丢失动物模型的建立及实验分组：将雌雄小鼠随机分组后按2：1 为妊娠丢失组(URSA组，孕第4天着床期尾静脉注射生理盐水1)、细胞治 疗组(Cellular 细胞)、非细胞治疗组(Non。cellularTherapy组，孕第4天尾静脉注射无关 个体BALB／c雄鼠脾T淋巴细胞来源exosomes)。 3观察胚胎发育情况：将各组CBA／J孕鼠于妊娠第14天分别处死， 解剖胎盘组织，测量后计算胎盘组织体积，将各组吸收胚胎、存活胚胎分 别计数，计算胚胎吸收率及妊娠丢失率。 4孕鼠外周NK细胞表型、表面受体及其效应分子的表达分析：各组 万方数据 中又捅要 CBA／J孕鼠于妊娠第14天分别处死，无菌解剖取脾，制备脾单个核细胞 悬液，用直接荧光标记流式细胞技术分别检测NK细胞特征性分化抗原 以及杀伤效应分子(CD56+Perforin+)的表达百分率。 5统计学处理：各组数据均通过SPSSl3．0版本软件进行正态性及方 差齐性检验。采用卡方检验比较各组孕鼠胚胎发育情况；采用F检验对孕 鼠外周NK细胞特征性分化抗原、表面受体、信号转导分子及效应分子的 进行两两比较。显著性检验水准萨O．05。 结果： l对妊娠丢失孕鼠胚胎发育的影响 输无关雄鼠细胞治疗组、T细胞来源exosomes的非