成年SD大鼠海马齿状回神经干细胞分离培养和-第三军医大学学报.DOC

成年SD大鼠神经干细胞分离培养和鉴定的改良 孟磊，周文科，金保哲，惠磊，钟根深，王仲伟，黄立勇，李武雄，常海刚，张新中＊ （新乡医学院第一附属医院神经外科，卫辉453003） 【摘要】目的 改良成年SD大鼠神经干细胞分离、培养及鉴定方法，观察神经干细胞的生长、增殖及分化特点，为后续实验提供细胞。方法 从成年SD大鼠分离出完整海马齿状回，采用机械吹打法获得原代细胞，用accutase消化传代，利用cck-8法检测神经干细胞的增殖情况，利用多重免疫荧光细胞化学方法鉴定神经干细胞及其分化细胞。结果 机械吹打法可高效获得原代神经干细胞，accutase消化传代更有利于神经干细胞的传代培养，cck-8法简单高效的测定了神经干细胞的增殖，多重免疫荧光创新性的动态展示了神经干细胞经诱导分化后的分化过程。结论 改良后的方法可以更加简单高效的获得和培养出大量细胞，经多重免疫荧光鉴定所分离和培养的细胞是神经干细胞。 【关键词】神经干细胞；细胞培养；成年大鼠；免疫荧光细胞化学 Improvement of isolation,culture and identification of neural stem cells from adult SD rat Meng Lei,Zhou Wenke,Jin Baozhe,Hui Lei，Zhong Genshen,Li Wuxiong,Chang Haigang,Zhang Xinzhong＊ （Department of neurosurgery，The first affiliated hospital of Xinxiang medical university，Weihui 453003，China） 2] Hsu YC, Lee DC, Chiu IM. Neural stem cells, neural progenitor cell and neurotrophic factors. Cell Transplant.2007;16: 133-150. [3]　Martino G, Pluchino S. The therapeutic potential of neural stem cells [ J] . Nat Rev Neurosci, 2006, 7 ( 5) :395-406. [4] Richardson RM, Larson PS, Bankiewicz KS. Gene and cell delivery to the degenerated striatum: status of preclinical efforts in primate models. Neurosurgery.2008; 63: 629-645. [5] McBride JL,Behrstock SP, Chen EY, et al. Human neural stem cell transplants improve motor function in a rat model of Huntington’s disease[ J ]. J Comp Neurol, 2004, 475: 211-9. [6] Martino G, Pluchino S. The therapeutic potential of neural stem cells. Nat Rev Neurosci.2006;7(5): 395-406. [7] Galvin KA,Jones DG.Adult human neural stem cells for cell-replacement therapies in the central nervous system[J].MJA,2002,177 (6):316 -318. [8] 葛岩,王医术,张丽红,等.Wistar大鼠胚胎脑源性神经干细胞分离、培养及其鉴定[J].中风与神经疾病杂志, 2009,26(3):266-269. [9] 陈梅玲, 沈岳飞, 刘开祥,等.大鼠神经干细胞体外培养的研究[J].广东医学，2011，32（1）：34-37. [10] 张清勇， 杨波，赵新利,等.胚胎大鼠神经干细胞的培养及鉴定[J].郑州大学学报，2003，38（1）：5-7. [11]胡钧涛,涂汉军,张力,等.大鼠胚胎神经干细胞两种不同分离、传代方法的比较[J].中国神经精神疾病杂志, 2006, 32(2):164-166. [12] 王振宇,季丽莉,佟雷,等.不同鼠龄生后大鼠海马神经干细胞的传代和分化[J].解剖科学进展, 2008, 14(1): 28-31. [13] 李 梅，王湘臻，徐铁军 ,等.海马神经干细胞不同传代方法的比较[J].中国组织工程研究与临床康