动态压力促进骨基质支架中微血管形成的实验探究.pdfVIP

IIIIf l I I IIIIrll IllI llI ＼1 目 录 一、摘要 中文论著摘要……………………………………………………………………¨1 英文论著摘要………………………………………………………………………3 二、英文缩略语………………………………………………………………………．．5 三、论文 前言…………………………………………………………………………………………………………”6 刖舌…………………………………………………………………………………………………………”O 材料与方法………………………………………………………………………．．7 结果…………………………………………………………………………………………………………15 讨论…………………………………………………………………………………………………………22 结论…………………………………………………………………………………………………………25 四、本研究创新性的自我评价………………………………………………………26 五、参考文献…………………………………………………………………………27 六、附录 综述…………………………………………………………………………………………………………30 致谢………………………………………………………………………………一38 个人简介…………………………………………………………………………～39 ·中文论著摘要· 动态压力促进骨基质支架中微血管形成的实验研究 目 的 分离、获取大鼠骨髓单个核细胞，条件培养基诱导成血管内皮祖细胞，观察 体外培养主要生物学特点，免疫组化及免疫荧光鉴定。在体外制备猪脱钙骨基质 支架，电镜扫面观察组织形态。将血管内皮祖细胞种植在脱钙骨基质支架上，将 细胞．支架复合体置于生物型压力反应器给予适当压力干预，观察其形成血管能 力。 方 法 取50克Wistar大鼠，采用密度梯度离心法结合差速贴壁筛选法分离出骨髓单 个核细胞，用条件培养液从原代开始诱导培养，诱导其形成血管内皮祖细胞，并 对诱导细胞进行免疫组化及免疫荧光鉴定。取适当大小猪脊柱椎体松质骨，通过 组织固定、脱脂、脱钙等步骤制备出脱钙骨基质支架。取第三代血管内皮祖细胞 种植在脱钙骨基质支架，将细胞．支架复合物随机分为A、B两组，A组置放在生 物型压力反应器，给予1Hz频率，5％形变压力值，五天后将细胞．支架复合物取 出，继续培养直至两周，B组直接培养两周，观察两组支架上的细胞血管形成能 力。RT-PCR检测两组EPCs分化相关因子mRNA表达。 结 果 新提取的细胞呈圆形，大小不一。24小时差速贴壁，36小时后可见部分细胞 贴壁，并逐渐出现梭形、三角形、纺锤形或不规则形等形态。7天左右出现细胞 集落，中央呈圆形，周围梭形细胞放射性生长。10—12天集落细胞呈单层铺路石 样生长。细胞．支架复合物电镜下可见脱钙骨基质孔隙网架结构，骨小梁、小梁间 隙和骨内管腔系统同时存在，细胞铺满材料表面，临近细胞相互融合。A、B两组 HE染色和荧光染色可见血管束形成，且A组细胞明显多于B组。用RT-PCR法 mRNA的表达情况，A组表达明显强于B组。 检测两组EPCs培养后vWF和Flk．1 结论 密度梯度离心法结合差速贴壁法提取血管内皮祖细胞简便、快捷，生长状态 稳定，增殖能力强。可以认为血管内皮祖细胞是一种理想的骨组织工程种子细胞。 脱钙骨基质是一种良好的载体支架材料，与血管内皮祖细胞复合构建组织工程骨 给予适当压力干预后能明显促进移植骨的血管化，在修复骨缺损方面具有临床应 用价值