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对A431 细胞经典自噬水平的初步研究 中文摘要 对A431 细胞经典自噬水平的初步研究 中文摘要 目的：探讨经典自噬诱导剂雷帕霉素和饥饿处理对A431 细胞自噬水平的影响。 方法 分别将A431 细胞和HeLa 细胞设置为对照组、DMSO 组、20nM 雷帕霉素组、 80nM 雷帕霉素组、EBSS 组。免疫印迹法（Western Blotting ）检测A431 细胞和HeLa 细胞自噬相关蛋白LC3A/B 、GAPDH、GABARAP 的表达水平。吖啶橙（acridine orange , AO ）染色观察不同处理后A431 细胞、HeLa 细胞自噬体表达水平。 结果：western blot 结果显示HeLa 细胞的对照组与DMSO 组中LC3II/LC3I 的比 值相一致，无统计学意义（P0.05 ）；20nM 雷帕霉素、80nM 雷帕霉素、EBSS 的 LC3II/LC3I 比值比较对照组明显升高，差异有统计学意义（P0.05 ）。A431 细胞的对 照组与 DMSO 组中 LC3II/LC3I 的比值无明显变化，差异无统计学意义（P0.05 ）； 20nM 雷帕霉素、80nM 雷帕霉素、EBSS 的LC3II/LC3I 比值跟对照组相比明显升高， 差异有统计学意义（P0.05 ）。通过SPSS 将HeLa 、A431 细胞的GABARAP、LC3I 和LC3II 进行双变量的相关性分析。结果显示HeLa 细胞的LC3I 型与GABARAP 的 pearson 相关性为0.669，说明LC3I 和GABARAP 为正相关。LC3II 型与GABARAP 的pearson 相关性为-0.742，说明负相关。A431 细胞LC3I 型与GABARAP 的pearson 相关性为0.837，说明LC3I 和GABARAP 为正相关。LC3II 型与GABARAP 的pearson 相关性为-0.184，说明负相关。HeLa 细胞吖啶橙染色后在显微镜下观察，可见雷帕霉 素组（33.307%±0.715% ）跟对照组（14.117%±0.295%）相比自噬阳性细胞率明显增 高（P0.05 ）；EBSS 组（66.097%±1.141% ）跟对照组相比，自噬阳性细胞率明显增 高（P0.05 ）。A431 细胞雷帕霉素组（23.750%±0.260% ）与对照组（15.987%±0.242%） 比较，自噬阳性细胞率明显增高（P0.05 ）；EBSS 组（32.450%±0.488% ）跟对照组 比较，自噬阳性细胞率同样增高（P0.05 ）。 结论：经典自噬诱导剂雷帕霉素和饥饿能够上调A431 细胞的自噬水平，通过相 关性分析GABARAP 蛋白可能与LC3 高度相关。 关键词：自噬；A431 ；GABARAP 作 者：张 云 指导教师：施 辛 I Abstract 对A431 细胞经典自噬水平的初步研究 The classical autophagy levels of human squamous cell carcinoma (A431) : a preliminary study Abstract Objective: To investigate the effects of autophagy induced by the classical inducer of rapamycin and starvation in human squamous cell carcinoma (A431). Methods: A431 and H