氨基胍对缺血再灌注肾损伤小鼠的保护作用和可能机制.pdfVIP

摘要 摘要 schemic 缺血再灌注损伤(i reperfusioni巧ury，IRI)是指组织或器官在缺血及 重获血流灌注或氧供应后，对组织或器官产生的损伤作用。肾是高灌注器官，对 缺血缺氧较为敏感，因此肾缺血一再灌注损伤在临床上较为常见。研究表明，肾 renal 缺血一再灌注损伤是引起急性。肾衰竭(acutef砸lure，ARF)和慢性肾衰竭 (chronicrenalfailure，CI强)的主要原因。但是缺血再灌注肾损伤的发病机制至 今尚未完全阐明。因此，明确肾缺血一再灌注损伤的发病机理，寻求缓解损伤或 者治疗方法成为当前研究的热点。 bee 研究表明缺血再灌注肾损伤的发生与ATP减少、大量氧自由基(Oxygen radical，OFR)产生、细胞内钙超载和细胞凋亡基因调控等介导的肾小管和肾小球 nitricoxide 细胞损伤的关系密切。亦有研究显示诱导型一氧化氮合酶(inducible synthase，iNOS)在肾缺血再灌注损伤中发挥重要作用，但其具体作用目前尚存 在争议。有研究表明，降低iNOS表达可以减轻缺血再灌注损伤，而另一些研究 则认为提高iNOS表达能减轻缺血再灌注损伤。为进一步探讨肾缺血再灌注损伤 与iNOS的关系，我们构建了小鼠缺血再灌注肾损伤模型，通过realqimePCR和 免疫组织化学方法对比iNOSmRNA和蛋白在假手术组和缺血再灌注组小鼠表 达的差异，同时给予缺血再灌注肾损伤小鼠术前应用iNOS特异性抑制剂AG并 对比肾损伤程度，以期明确肾缺血再灌注损伤和iNOS的关系并寻求治疗方法。 本研究主要由以下三部分内容组成。 一、小鼠缺血再灌注肾损伤模型的建立 为研究缺血再灌注肾损伤的发生机理，我们制作了小鼠缺血再灌注肾损伤模 型。制作肾IRI动物模型的方法包括双侧肾蒂夹闭、双侧肾动脉夹闭、单侧肾切 除+对侧肾动脉夹闭等。本实验是通过双侧肾蒂夹闭法制作小鼠缺血再灌注模型。 通过参阅相关文献及多次预实验，我们发现手术方法不同、血管夹闭的时间长短、 术中温度的控制、鼠龄等均对实验结果有重要影响，尤其是术中温度和夹闭肾蒂 的时间在此过程中起着不可忽视的作用。经过不断摸索，多次检测造模24小时 后尿素氮、肌酐水平，我们最终确定术中温度37。C，双侧肾蒂夹闭45分钟为制 摘要 作本模型的必需条件。 二、小鼠缺血再灌注肾损伤对iNOS的影响 一氧化氮合酶(nitricoxide synthase，NOS)是一氧化氮(oxidesynthase， NO)生物合成的关键限速酶，可催化L．精氨酸转化为L一胍氨酸和NO。主要包 括神经元型NOS、内皮型NOS和iNOS。病理状态下，iNOS可被细胞因子、创 伤等诱导表达并催化产生大量NO，引起体内一系列病理生理变化，导致组织器 官损伤。但是iNOS在缺血再灌注损伤中的作用一直存在争议。本研究通过建立 小鼠缺血再灌注肾损伤模型，造模24小时后提取小鼠肾组织mRNA进行 real-time PCR检测iNOSmRNA的变化情况并通过免疫组织化学技术对比小鼠缺 血再灌注肾损伤后iNOS蛋白表达水平的变化情况，结果发现缺血再灌注肾损伤 后小鼠iNOSmRNA和蛋白的表达均明显增加，提示iNOS增高可能是引起小鼠 缺血再灌注肾损伤的发病机理之一。 氨基胍是一类胍类化合物，可特异性抑制iNOS活性，减少NO生成。本研 mRNA 究发现术前注射AG(50mg／Kg)可明显降低缺血再灌注肾损伤后的iNOS 和蛋白的表达水平，减轻肾损伤程度(尿素氮、肌酐水平降低)。究其原因可能 是AG特异性抑制iNOS的表达，减少其催化产生的NO及氧自由基，从而阻断 了NO及氧自由基等所介导的细胞毒效应，发挥保护