丝素蛋白%2frhBMP-2微球复合双相磷酸钙的实验的分析研究.pdfVIP

丝素蛋白/rhBMP-2 微球复合双相磷酸钙的实验研究 中文摘要 丝素蛋白/rhBMP-2 微球复合双相磷酸钙的实验研究 中文摘要 第一部分 丝素蛋白/重组人骨形态发生蛋白2 缓释微球的制备及异位成 骨活性研究 目的：将丝素蛋白 （SF）作为重组人骨形态发生蛋白 2 （rhBMP-2 ）的缓释载体， 制备合适粒径的丝素蛋白/rhBMP-2 微球，并研究其异位成骨活性，为后续试验提供 材料基础。 方法：采用冷冻干燥法制备SF/rhBMP-2 微球及SF 微球，扫描电镜观察其加入不同 比例交联剂制备的SF/rhBMP-2 微球形态，ELISA 法测定不同时间点SF/rhBMP-2 微 球磷酸盐缓冲液中rhBMP-2 浓度，计算微球rhBMP-2 的累积释放量及微球载药率。 将 SF 微球及SF/rhBMP-2 微球、rhBMP-2 分别植入24 只大鼠大腿肌袋，SF 微球组 为对照组。术后1 周、2 周、4 周处死大鼠，切除植入微球材料的周围组织，HE 染色 后行组织学观察。 结果：SF/rhBMP-2 微球呈规则圆形，随乙醇比例浓度的增加微球直径减小；微球 含有的 rhBMP-2 其释放曲线符合双相动力学释药规律；组织形态学观察见实验组有 软骨细胞及成骨细胞形成。 结论：利用再生丝素蛋白溶液可以制备粒径大小不一、可负载rhBMP-2 的丝素蛋白 /rhBMP-2 微球。丝素蛋白/rhBMP-2 微球可保持 rhBMP-2 的活性，能延缓rhBMP-2 的释放时间，释放具有双相规律；丝素蛋白/rhBMP-2 微球具有持续诱导骨形成的特 点。 关键词：丝素蛋白 微球 重组人骨形态发生蛋白2 异位成骨 I 中文摘要 丝素蛋白/rhBMP-2 微球复合双相磷酸钙的实验研究 第二部分 丝素蛋白/重组人骨形态发生蛋白2/双相磷酸钙人工骨的制备 及生物学活性研究 目的：制备含SF/rhBMP-2 微球的双相磷酸钙（BCP ）人工骨材料，研究其理化性能 及组织相容性。 方法：通过溶液共沉淀法合成m （HA ）/m(β-TCP)=6:4 的粉体。傅里叶变换红外光 谱分析材料的成分；扫描电镜(SEM)观察材料微观形态。然后以 30mg/g 质量比将先 前制备的微球与双相磷酸钙粉末混匀，加入50%、100%、150%比例的氯化钠作为制 孔剂制备人工骨材料。利用生物力学测试机测试材料的抗压强度，描绘其压力-位移 曲线；Micro-CT 测试材料的孔隙率，在X 线入射偏角为2θ 条件下，行X 射线衍射 分析材料成分；将材料浸出液与人胎盘间充质干细胞（hPMSCs ）共培养，cck-8 法观 测细胞的增殖生长情况；将材料与hPMSCs 共培养7d 后, SEM 观察细胞在材料表面 的粘附情况；将与胎盘间充质干细胞共培养10d 后的细胞用0.25%胰酶消化后，茜素 红染色及碱性磷酸酶（ALP ）观察人工骨的诱导成骨能力。 结果：加入 150%制孔剂的人工骨材料抗压缩强度（约 30Mpa ）大于松质骨水平， 孔隙率为 78.83% 。浸出液对细胞的生长增殖与正常培养组比较无统计学差异 （P0.05 ）；经碱性磷酸酶及茜素红染色发现，生长在材料表面的干细胞表达成骨细 胞特征。 结论：丝素蛋白/重组人骨形态发生蛋白2/双相磷酸钙人工骨材料的强度大于松质骨 水平，其孔隙率及孔径可调；丝素蛋白/重组人骨形态发生蛋白 2/双相磷酸钙人工骨 材料可以诱导粘附、生长在其表面的细胞向成骨方向分化，对细胞的增殖生长无影响， 其作为组织工程骨的支架材料是可行的。 关键词：双相磷酸钙 生物相容性 骨组织工程 作 者：王春增