过表达LCN--2卵巢癌细胞系的构建和影响.pdfVIP

目 录 中文摘要………·…………”…………………………………………………1 英文摘要……………·………………．…．．…………………………………一4 研究论文过表达LCN．2卵巢癌细胞系的构建及影响 前言…………………………………。………………………………………………………7刖舌……………………………………………………………………………………………7 材料与方法………………“……………………………………………8 结果…………………………………………··………………………………………………··18 附图……………¨……………………………………………………··23 讨{仑………………．．…………………………………··………………………………………26 结论……………………………………………………………··………………………”……27 参考文献…………………………………………………………………27 综述LCN．2在人类肿瘤中的研究进展………．．．……………………·…”29 致谢……………………………………………………………………………………………………36 个人简历……………………………………………………………………··37 中文摘要 过表达LCN．2卵巢癌细胞系的构建及影响 摘 要 目的：卵巢癌在妇科的恶性肿瘤中病死率极高，是女性生殖系统三大 恶性肿瘤之一，严重威胁着女性健康。虽然诊断方法仍在不断的改进，但 是卵巢癌的易复发及伴随出现的转移和多重耐药性，严重影响到卵巢癌的 治疗效果。由于在患病早期无特异性症状，缺乏有效的早期诊断措施，大 部分患者确诊时已多处于晚期，让患者错过了最佳的治疗时机。为了能够 做到早诊断早治疗，在早期有一些肿瘤抗原标记物，例如经典的CAl25、 CAl99等，对于不同类型、不同部位的肿瘤大多伴有不同程度的变化。特 别是一些肿瘤标记物随着恶性程度的增加有相应规律的变化，虽不具有普 遍性，但已经对卵巢癌的早期诊断、治疗及手术预后疗效的改善给予了极 大的参考意见。 lipocalin， 调与多种人类肿瘤相关，包括肝癌，乳腺癌，子宫内膜癌和卵巢癌。然而， LCN．2在肿瘤细胞中的生物学作用还不是很清楚。本研究通过过表达LC N一2的方法来检测其对卵巢癌细胞增殖的影响，探讨LCN一2在卵巢癌中 的表达和发展规律，为迸一步研究LCN一2在卵巢癌细胞中的作用机制提 供信息平台，以及为治疗卵巢癌提供更多有价值的信息。 方法：Western 筛选，探测未转染质粒的ES2细胞的生存临界浓度；采用稳定转染法观 察过表达LCN．2在卵巢癌细胞中的生长状况，通过G418的筛选建立稳定 卵巢癌细胞增殖的影响。 结果： 1 Western 中文摘要 SKOV3较低表达 Western 形和多边形上皮样细胞状，ES2细胞形态呈椭圆形，SKOV3呈梭状上皮 样细胞形态。 证质粒及LCN．2抗体的可用性 作为实验组； pcDNA3．1／mycHis．LCN．2，PEGFPN3．LCN．2 pcDNA3．1／mycHi～S Western Blot分析检测转染LCN．2的实验组均明显过表达，充分可以说明 LCN．2质粒构建成功，抗体结合良好。 3G418药物浓度检测ES2产生耐药的生长临界浓度是70099／ml。 G41 生长临界浓度为70099／ml。 4成功构建LCN．2稳定过表达的ES2细胞系 G418 瞬时转染的预实验成功后，稳定转染ES2细胞系，用70099／ml 进行筛选，约两周后克隆形成。选择生长状态良好的细胞团进行增殖，收 1，#