钙化血管平滑肌细胞中CaN对PKGI的调节影响.pdfVIP

目 中文摘要…………………………·· 英文摘要…………………………·· 研究论文钙化血管平滑肌细胞中 —1L—JL· 日lJ吾…”一””一””一“”一“…“ 材料与方法…………………·· 结果…………………………一 附图…………………………一 附表…………………………一 讨{念“一“““””一一”一”“一“” 结论……………一一一“一“一一· 参考文献……………………·· 综述钙化血管平滑肌细胞中CaN 致谢………………………………一 个人简历…………………………·· 中文摘要 钙化血管平滑肌细胞中CaN对PKGI的调节作用 摘 要 目的：血管钙化是多种疾病的病理基础，与动脉粥样硬化关系最 为密切，它使动脉机械性质发生了改变，可造成血栓的形成、粥样斑 块的破裂、外周血管堵塞缺血、主动脉狭窄、心肌缺血和梗死等严重 后果，增加了气囊血管成形术中血管破裂和心血管生物修复术失败的 风险。导致心脏瓣膜钙化的主要原因是机械损伤和炎症，累及的主要 部位在主动脉瓣和二尖瓣，钙化的结果可致瓣膜狭窄和／或返流，是心 脏瓣膜置换术的重要原因所在。以上所述的血管以及心脏瓣膜的钙化 是心血管发生钙化的常见部位。 以往认为血管细胞钙化是钙盐在细胞内及细胞外基质的被动沉 积，是血管细胞老化的标志，然而新近的研究发现血管细胞钙化是一 个复杂的、主动的、可调控的生物学过程，是活跃的血管结构的骨化， 类似于骨和软骨形成过程中的骨化。 酶。C烈广泛分布在多种组织细胞中，是一种多功能信号酶，主要通 过使NFⅪ等底物的去磷酸化及核内转位，激活下游基因使其转录， 参与调节多种细胞的功能。最近研究证实，CaN信号通路参与了血管 smoothmuscle 平滑肌细胞(vasculaur cell，VSMC)的增殖和功能的维持。 不同的刺激物(如PDGF2BB、凝血酶和AngII等)可诱导NF．AT传 递胞外信号，激活VSMC核内相关基因进行转录，最终刺激VSMC 增殖，这一过程可被CaN特异性抑制剂CsA阻断。 环鸟苷酸依赖的蛋白激酶(cGMP．dependentproteinkinase，PKG) 是广泛的存在于真核细胞内部的一种丝氨酸／苏氨酸蛋白激酶。一氧化 氮(nitric 成，然后由cGMP激活PKG进而调节局部和全身信号等。近年来研究 胞浆内与PKGI的关系目前国内外尚未见有报道。 本试验采用磷酸二氢钠建立大鼠主动脉VSMCs钙化模型，测定 中文摘要 细胞PKGI及CaNmRNA、蛋白质的表达及活性，并观察CaN对PKG I表达的影响，初步探讨CaN及PKGI对血管细胞钙化的调节作用， 为血管细胞钙化的临床防治提供新的思路。 方法：大鼠胸大动脉VSMCs传代完成后，将实验细胞随机分为3 组。A组：对照组；B组：钙化组；C组：干预组(简称CsA组)。A 组给予正常对照的GMDM培养基3ml，B组给予磷酸二氢钠配制浓度 茜素红染色示钙化组大鼠主动脉VSMCs呈梭形，排列紊乱，可见大量 褐色钙化点，提示细胞钙化成功。取材后每组用E11esa法测定大鼠主 动脉VSMCs a：NB CaN、Ca2+活性，实时荧光定量反转录PCR法测定C mIⅢA和PKGImI矾A，Westema_NB及PKG blot测定C I蛋白定量， 采用比色法测定碱性磷酸酶(ALP)活性；所有数据以均数士标准差(i士s) 表示，运用SPSS13．O统计软件，首先对计量资料进行正态性检验及 方差齐性检验，组间资料比较应用单因素方差分析，两两比较应用 LSD．t检验，尸O．05即有统计学意义。 结果：(1)茜素红染色结果示对照组