非小细胞肺癌95D细胞株目的microRNA的筛选和let-7a体外调控95D细胞侵袭能力的实验研究.pdfVIP

中文摘要 体外调控95D细胞侵袭能力的实验研究 中文摘要 第一部分目的microRNA的筛选和let-7a在肺癌组织中的表达 【目的】筛选非小细胞肺癌95D细胞株的目的microRNA。 【方法】通过对CpG 芯片检测，筛选出变化幅度最大的microRNA。用Real-timePCR方法检测和验证目的 microRNA在20例非小细胞肺癌患者肺癌组织和正常肺组织标本中的表达情况。 【结果】经CpG 肺组织，肺癌组织中let-7a的整体表达明显低于正常肺组织，仅为后者的60％，差异 具有统计学意义。 ’ 第二部分let一7a慢病毒载体的构建与鉴定 【目的】构建let-7a慢病毒载体并进行鉴定。 【方法】分别构建let-7amimics和let-7ainhibitor慢病毒载体并包装。测定慢 病毒滴度，并进行靶细胞侵染实验。 的效率可达到95％左右，符合实验要求。RT-PCR检测证实，转染let一7amimics慢病 毒载体的95D细胞表达高水平的let-7a，而转染let-7a 细胞表达低水平的let-Ta，两者差异具有统计学意义。 【结论】let一7a慢病毒载体构建成功。 第三部分let-7a对非小细胞肺癌950细胞株增殖和侵袭能力的影响及分子机制探讨 【目的】观察let-7a对950细胞增殖及侵袭能力的影响，并探讨可能的分子学机制。 mimics慢病毒载体)和 【方法】将95D细胞株分为let-7a过表达组(转染let-7a let-7a抑制组(转染let-Ta 中文摘要 Real-time PCR及Westernblot法分别检测和比较上述两组细胞在mRNA和蛋白水平 表达KRAS和HMGA2基因的情况。 制组，差异具有统计学意义。上述两种基因在蛋白水平的表达情况则表现为let一7a 过表达组明显低于let-7a抑制组，差异具有统计学意义。 【结论】let-7a能抑制95D细胞株的增殖与侵袭，其中部分重要的机制可能是通过 mRNA的转录后水平来抑制这两种基因的蛋白表达。 调控KRASmRNA和HMGA2 【关键词】非小细胞肺癌；microRNA；let一7a；95D细胞；侵袭与转移 【中图分类号】R5 2 英文摘要 ofthe MicroRNAinNon—。SmallCell Cancer95D ScreeningTarget Lung CellsandObservationoftheInvasion of95DCells Ability let——7a Regulatedby Invitro ABSTRAcT PartI ofthe microRNAin95Dcellsandthe ScreeningTarget of determinationlet—。7a levelinNSCLCtissue expression samples screenthe microRNAin95Dcell line． [Objective]To