临床1,25-双羟维生素D3对实验性自身免疫性脊髓炎小鼠自噬的调控影响.pdfVIP

目 录 中文摘要……………………………………………………………………1 英文摘要……………………………………………………………………4 英文缩写……………………………………………………………………8 研究论文 1，25一双羟维生素D3对实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠自 噬的调控作用 前言……………………………………………………………………9 日U舌…………………………………………………………………… 材料与方法……………………………………………………………1O 结果……………………………………………………………………19 附图……………………………………………………………………22 讨论……………………………………………………………………26 结论……………………………………………………………………29 参考文献………………………………………………………………29 综述维生素D、自噬与疾病……………………………………………33 致谢…………………………………………………………………………42 个人简历……………………………………………………………………43 万方数据 中文摘要 1，25．双羟维生素D3对实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠自噬的 调控作用 摘 要 目的：多发性硬化不仅是中枢神经系统的自身免疫性疾病，也是一种 神经变性疾病，其发病率和地理纬度具有明显相关性，越远离赤道，多发 性硬化的发病率越高。本实验选用1,25(OH)12D3作为干预药物，研究其治 疗多发性硬化的有效性，不仅研究其对中枢神经系统白质髓鞘的影响，还 深入研究对灰质神经元的作用，并进一步探索其潜在的作用机制。 各组均为9只。 以MOG多肽为抗原免疫后两组小鼠建立EAE动物模型。以25099 充至400ng，充分混匀至油包水乳剂，制成完全抗原，双侧背部分4点皮 下注射。于免疫后的第0和48h两次给予小鼠腹腔内注射500ng的百日咳 毒素，以建立小鼠的EAE模型。免疫当天记为0天。VD3组小鼠自免疫 当天起每隔两日腹腔注射0．1ml 1,25(OH)2D3(用洁净蓖麻油稀释至浓度为 处死。从免疫当天开始，每天早晚(8：oo和16：oo)两次由两位观察者分 别对各组小鼠进行神经功能的评分、称重并给予记录。于免疫后第20天， 对三组小鼠进行取材。断颈处死小鼠后，对小鼠大脑组织新鲜取材，切分 成两部分，前三分之一，后三分之二(此部分以下称为侧脑室旁脑组织)， 一部分迅速投入液氮进行快速冷冻，后置于一80℃冰箱保存，进行Western 新鲜取材后置于4％多聚甲醛保存，部分制成石蜡切片，进行HE、LFB、 Nissl染色，观察炎性细胞的浸润、脱髓鞘情况及神经元形态数目变化； 剩余部分的侧脑室旁脑组织和腰骶膨大组织则制成冰冻切片，进行免疫荧 万方数据 中文摘要 NeuN和LC3，观察神经元自噬水平的变化。 数值采用“均数±标准差”表示，EAE发病率应用Fisher’S确切概率 U检验。两组间炎性浸润及脱髓鞘对比 法，临床评分应用Mann—Whitney ANOVA检验，两 应用t检验。多组间的计量资料均数比较应用One—Way 结果： 1 1,25(OH)2D3有效改善EAE小鼠的临床症状 空白对照组(Control组)小鼠均未发病，活动、食欲等方面均正常。 EAE组小鼠发病率达100％，自免疫第一天即出现不同幅度的体重下降， 之后逐渐出现活动减少、尾巴无力、反应不灵敏和皮毛不光滑等症状。 1．1％(尸0．01)。 1，25(OH)2D3治疗组(VD3组)小鼠至取材发病率仅为1 通过比较后两组中小鼠每天的神经功能评分的均数发现，自第11天开始， 之后P0．