人卵巢癌干细胞的分离培养及初步鉴定.pdfVIP

人卵巢癌干细胞的分离培养和初步鉴定 摘 要 目的 从人卵巢癌SKOV-3细胞中分离和培养卵巢癌干细胞，并鉴定其生物 学性质。 free 方法 人卵巢癌SKOV-3细胞在含有生长因子的无血清培养基(serum 记物和观察体外侵袭能力；将肿瘤细胞球传代扩增，并用含血清培养基 (serum-supplementedmedium，SSM)培养诱导其分化；将肿瘤细胞球分别置于含 血清和无血清培养基中进行交替培养，使其传代更新，进一步证实卵巢癌干细胞 的存在；将肿瘤细胞球和普通人卵巢癌SKOV-3细胞分别接种于96孔板，使用 CCK-8法分别检测它们的增殖能力及耐药性。 结果 (1)人卵巢癌SKOV-3细胞能在SFM中形成可以稳定传代的肿瘤细 胞球，并显示强大的自我更新和增殖能力，含血清环境(SSM)能够诱导其分化 而贴壁生长。肿瘤干细胞球可以连续传代，并可交替培养于含10％的胎牛血清培 free medium，SSM)和无血清培养基(serummedium， 养基(serum．supplemented 药性，将顺铂作用于细胞球及贴壁分化细胞24，48及72小时后，细胞球抑制率 分别为2．59％、8．43％、12．08％，显著低于贴壁分化细胞(抑制率分别为10．73 ％、28．13％、39．17％)，分别比较，差异均有统计学意义(PO．05)。 结论 (1)采用无血清悬浮培养法从人卵巢癌细胞系中获得的细胞球可能 含有一小部分具有自我更新和多向分化潜能的卵巢癌干细胞，其可以在含有生长 因子的无血清培养基中形成悬浮状态生长的肿瘤细胞球、并可以多次传代；高度 表达干细胞标志物CD44和CDI17抗原标记，且CD44更具有特异性。因此，人 卵巢癌SKOV-3中的肿瘤干细胞可以采用无血清悬浮法初步富集。(2)人卵巢癌 干细胞球比普通卵巢癌细胞更具有侵袭能力、耐药性。 硕士研究生 武加利(妇产科学) 指导教师 纪新强教授 关键词：卵巢肿瘤；肿瘤干细胞；肿瘤球状体细胞；无血清培养基， 悬浮培养 IsolationandinitiaIidentificationofhumanovariancancer stemcells Abstract To Abstractisolateand ovariaIlcancerstemcellsfromhumanovarian identify cancercelllineSKOV-3andto their identify biologicalproperties． MethodsSKOV-3cellswereculturedinserumfreemedium(SFM)、析th recombinanthuman factor(EGF)andbasicfibroblast epidermalgrowth growth derivetumor andcellinvasion factor(bFGF)tospheres．Flowcytometryanalysis assay were toexaminethecellsurfacemarker 117)and applied