人脂肪间充质干细胞治疗糖尿病肾病大鼠的探究.pdfVIP

人脂肪间充质千细胞治疗糖尿病肾病大鼠的研究 硕士生姓名： 刘翔飞 指导教师： 常明教授 指导小组： 陈香美教授 张利教授 专业名称： 内科学 摘要 目的：糖尿病肾病(diabetic 末期肾病(ESRD)的主要原因之一。临床上对于临床糖尿病肾病尚缺乏有效治疗方 stem 法。成体干细胞(Adultcells，ASC)具有干细胞自我更新及多向分化的能力的 共性优点，而且与胚胎干细胞相比具有获取容易、致瘤风险低、伦理学争议少等优 势，是目前最具有临床应用前景的干细胞。研究证实成体干细胞可以减轻肾脏损 伤、促进肾脏细胞再生修复，但对DN治疗的研究较少，且研究结果因DN模型 建立方式不同，治疗的效果也不同。本研究拟建立I型DN大鼠模型，观察人脂 stem 肪来源的间充质干细胞(humanAdipose-derivedmesenchymalcells，hAD．MSCs) 对大鼠糖尿病肾病的治疗作用及可能机制。 方法：l、动物模型建立：雄性SD大鼠，行右肾单肾切除，2周后腹腔注射 成功的标准筛选1型糖尿病大鼠，4周后每天给予鱼精蛋白锌胰岛素皮下注射 2．4IU，维持血糖在16．7．33．3mmol／L范围。自造模之日起，每2周检测体重变化， 每4周检测血糖及24h尿蛋白定量变化；2、实验分组：①单纯单肾切除组(NX)： 1 经尾静脉注射hAD．MSCs，剂量5x06个；NX+STZ组经尾静脉注射等体积PBS 溶液，4周1次，连续5次。4、评价指标：①自注射STZ始，32周为实验终点； ②取肾脏，计算肾脏／体重比值；部分肾、胰腺组织迅速置于液氮，行分子生物学 检测；部分肾组织OCT包埋置于液氮保存，行冰冻切片，部分肾组织和胰腺中性 福尔马林固定，常规石蜡包埋、切片；③显微镜下观察各组大鼠胰岛的形态学改 变，石蜡切片通过双重免疫荧光和激光共聚焦技术观察胰岛胰岛素和胰高血糖素 的表达。肾组织石蜡切片行PAS染色，观察病理变化并行半定量评分，冰冻切片 blot观察 行免疫荧光法观察足细胞标志物synaptopodin表达。@western 鼠肾脏、心脏、肺、肝脏、脾脏经冰冻切片后于共聚焦显微镜下观察hAD—MSCs 定植情况。 结果：1．利用STZ注射联合单肾切除的方法成功制备了糖尿病肾病大鼠模型： 1+0． 球硬化、肾小管上皮细胞空泡变性、蛋白管型形成、肾小管扩张、局灶肾小管萎 缩及炎细胞的浸润、足细胞标志物synaptopodin的表达明显减少等损伤，胰腺病 理表现为胰岛萎缩且数量减少。2．干细胞治疗对DN和胰腺损伤的疗效评价：① mmol／L， 30．8士7．4 组明显降低(369．44士193．65 截面积减小(20．07士2．58Inn2x103，16．33士2．1 显著降低，④免疫荧光及western 3．示踪结果：移植hAD．MSCs后自lh至48h可在大鼠肺、脾脏、肾脏及胰腺观 察到少量hAD．MSCs定植，48h后未在大鼠组织中找到标记的细胞。 结论：本研究建立了稳定、症状明显的大鼠I型糖尿病导致的糖尿病肾病模 型；多次静脉注射hAD．MSCs可明显减轻糖尿病大鼠尿蛋白，减轻肾小球肥大、 足细胞损伤，减少间质炎细胞浸润及间质纤维化，hAD．MSCs对肾脏的保护作用 与干细胞定植分化及血糖无关。 关键词：间充质干细胞糖尿病肾病肾损伤 2 the ofhuman on role Study