人脐带间充质干细胞移植对大鼠闭合性颅脑损伤的作用探究.pdfVIP

中文摘要 人脐带间充质千细胞移植对大鼠闭合性 颅脑损伤的作用研究 摘 要 brain 目的：建立大鼠颅脑损伤(traumatic umbilicalcord stem 间充质干细胞(human mesenchymal 在损伤脑组织中存活、迁移和分化情况，以及对损伤神经功能恢复的影响； 初步探讨hUC。MSCs治疗颅脑损伤的作用机制，为其在颅脑损伤治疗的 应用提供理论依据。 方法：取足月妊娠剖宫产健康新生儿的脐带，D．Hank’S液充分洗去 残留血液，剔除脐动脉和脐静脉，将剩余的脐带间质组织剪成约1mm3大 bovine 小的组织块，用O．2％胶原酶II消化后放入含有20％胎牛血清(fetal serum，FBS)、100 观察原代培养细胞的形态学变化，当细胞达到80％～90％汇合时，进行消 CDl lb—PE和CD34一FITC、CDl9一FITC， 05一PE、CD73(SH3)．PE、CDl 照。 液压冲击法制备颅脑损伤模型，24 h后，依照改良神经功能评分(modified Severity 1)，将 NeurologicalScore，mNSS)标准进行神经功能评分(Table 组：20只，评分结束后将1，1’．双十八烷．3，3，3’，3’，四甲基吲哚羰花青．高氯 x 胞数为ll buffered saline，PBS)组：20 06个；(2)磷酸盐缓冲液(phosphate 只，颅脑损伤部位以PBS替代hCU．MSCs注射，亦取两点，每点5u1； (3)单纯颅脑损伤组：10只，仅行颅脑损伤，损伤部位既不移植 骨窗，不行颅脑损伤，亦不注射hUC．MSCs或PBS。 中文摘要 大鼠于hUC．MSCs移植／PBS注射后第1、7、14、2l、28d采用mNSS 进行神经功能评分，观察大鼠神经功能改善和恢复情况。评分结束后处死 大鼠，取脑组织行连续冰冻切片，厚5岬。免疫荧光方法检测hUC．MSCs 在脑组织内存活、迁移、分化情况，以及胶质纤维酸性蛋白(glialfibrillary acidic enolase， protein，GFAP)、神经元特异性烯醇化酶(neuronspecific 2，MAP。2)、八因子 NSE)、微管相关蛋白2(microtubule．associatedprotein VIIIrelated 相关抗原(factor antigen，Ⅶ．R NF)、巢蛋白(Nestin)的表达情况。 结果： 原代细胞培养24h后观察到有少量细胞贴壁，8～10d后细胞大部分 贴壁。2 代。细胞传代后生长迅速，形态均一，5~6 d可传一代。流式细胞术检测 不表达造血前体细胞表面抗原CD34、B型淋巴细胞表面抗原CDl9、中 性粒细胞表面抗原CDl lb、白细胞表面抗原CD45和甩A．DR，从而证实 ．2．y1．2，5．diphenytetrazolium 细胞存活率达95％以上。