人羊膜上皮细胞移植治疗创伤性脊髓损伤的移植免疫探究.pdfVIP

人羊膜上皮细胞移植治疗创伤性脊髓损伤的移植免疫研究 中文摘要 人羊膜上皮细胞移植治疗创伤性脊髓损伤的移植免疫研究 中文摘要 目 的：脊髓损伤的治疗一直是医学的研究热点，脊髓损伤后自身的修复能力非常有 限，而死亡的神经元不能由周围神经元代替且神经元再生能力极弱，如何实现脊髓损 伤后神经再生与修复一直是该领域的难点和热点。脊髓损伤后留有严重的残疾给患者 带来极大的痛苦，近年来，随着干细胞研究的进展，给患者带来神经功能重建的希望。 随着研究的进展，各种干细胞陆续出现并取得一定的研究成果，同时，也发现不同细 胞在移植治疗脊髓损伤方面存在的各种局限性。比如，细胞移植后由于免疫排斥反应 导致的一系列并发症，或随年龄老化而致干细胞含量及其增殖能力显著降低，存在伦 理问题，等等。本研究旨在通过对人羊膜上皮细胞与研究较多的骨髓间充质干细胞移 植后移植免疫情况作对比，来揭示人羊膜上皮细胞移植治疗创伤性脊髓损伤在移植免 疫方面的优势。 方 法：1、将人羊膜上皮细胞与骨髓间充质细胞培养解冻，置于培养基中于37℃、 5%CO2 温箱中培养。 2 、将21 只SD 大鼠（体质量250～300g，7 周龄）显微镜下半横断脊髓建立动 物模型，脊髓横断后，立即将预先调适细胞密度的 HAECs 、BMSC 、PBS 分别植入 各分组大鼠的横断部位；设羊膜上皮细胞移植组、骨髓间充质细胞移植组、PBS 液对 照组三组。 3、细胞植入后每3 天进行一次Basso Beattie Bresnahan 运动功能评分（BBB 评 分），评价后肢运动功能恢复情况，持续2 个月，根据BBB 评分变化情况来观察大 鼠肢体功能恢复趋势。 4 、在细胞移植后一周和三个月，各组分别随机选取2 只大鼠，在损伤部位手术 切取损伤段脊髓，于4%多聚甲醛固定液中固定24 h 后行石蜡包埋，利用免疫组织化 + 学法标记CD3 T 细胞并在显微镜下观察T 细胞浸润情况。选取CD3 阳性细胞最多处， 每张切片随机选择5 个高倍视野 （×400）下进行阳性细胞计数。 I 中文摘要 人羊膜上皮细胞移植治疗创伤性脊髓损伤的移植免疫研究 5、分别于细胞植入后1 周、1 个月、2 个月、3 个月时抽取静脉血并分离血清。 用ELISA 法测定大鼠血清IL-2 和IL-10 OD 值，观察二者变化情况。 结 果：1、两种细胞具有相似的生长周期与规律。羊膜上皮细胞呈圆形或椭圆形， 核大，胞质中富有脂肪滴。 2 、BBB 评分显示，三组大鼠在移植后三周内均有较快恢复并在三周后进入平台 期，细胞移植组恢复更明显且羊膜上皮细胞组优于骨髓间充质细胞组（P0.05 ）。 + 3、CD3 免疫组化显示各组切片在早期均有 CD3 细胞浸润，移植后三个月羊膜 + 上皮细胞组CD3 细胞浸润明显少于骨髓间充质细胞组（P0.05 ）。 4 、羊膜上皮细胞组大鼠血清 IL-2 的水平较骨髓间充质细胞组明显偏低，IL-10 水平则偏高。 结 论：人羊膜上皮细胞与大鼠骨髓间充质干细胞相比具有相似的生长规律，且同时 增殖五代后仍保持较强的增殖活力；细胞移植治疗脊髓损伤效果明显，且人羊膜上皮 细胞较大鼠骨髓间充质细胞的免疫源性为弱；人羊膜上皮细胞作为一种特殊的―干细 胞‖用于治疗脊髓损伤具有显著优势。 关键词：人羊膜上皮细胞；大鼠骨髓间充质细胞；脊髓损伤；细胞移植；免疫排斥反 应；免疫组织化学 作 者：张洪高 指导教师：方 琪 惠国桢 II 人羊膜上皮细胞移植治疗创伤性脊髓损伤的移植免疫研究