人羊膜上皮细胞的性质探究.pdfVIP

中文摘要 研究背景 各类心脏疾病导致的心肌损伤和坏死，是日前世界各国的最主要死亡原因之 一。即使在当前介入治疗、心脏手术和各类药物治疗等多种治疗手段下，由心肌 损伤和坏死所导致的心力衰竭的治疗效果仍旧不甚理想。而以干细胞为基础的细 胞治疗和组织工程有望修复损伤心肌，因此成为目前再生医学研究中备受关注的 热点。而如何选择一种最适合应用于临床细胞治疗的种子细胞，是研究者们面对 的首要问题和关键问题。人羊膜来源干细胞尤其是人羊膜上皮细胞表达多种胚胎 干细胞的标记物、具有较全面的多分化潜能，并且因其具有“含量丰富、容易获 取、不引起伦理争议、无致瘤性、免疫原性低、安全性高”等诸多胚胎干细胞和 成体干细胞所不具备的优势和特点，有望成为未来再生医学临床应用的重要种子 细胞来源及最适合应用于临床细胞治疗的种子细胞类型。 实验目的 l 探索足月人羊膜上皮细胞和人羊膜间充质基质细胞类胚胎干细胞性质差异。 2 探索足月人羊膜上皮层内不同位置／层面上皮细胞的类胚胎干细胞性质差异。 实验方法 1 人羊膜全层制作石蜡切片，运用免疫组织化学染色法，测定人羊膜各层细胞 对多种胚胎干细胞标记物的表达情况； 2 分层消化人羊膜上皮细胞和人羊膜间充质基质细胞，对新鲜分离细胞，运用 流式细胞学分析、免疫荧光法观察测定其对多种胚胎干细胞标记物的表达情况； 3 在人羊膜上皮层内，分阶段消化其不同层面的上皮细胞，运用流式细胞学分 析、免疫荧光法观察测定其对多种胚胎干细胞标记物的表达情况； 4 经胰酶消化去上皮后的人羊膜组织，直接运用免疫组织化学染色法测定存留 细胞上皮的特有属性，同时制作石蜡切片，运用免疫组织化学染色法测定存留细 胞对多种胚胎干细胞标记物的表达情况。 实验结果 1 人羊膜上皮层绝大部分是典型的单层立方上皮，但局部存在多层上皮细胞紧 密排列而成的非单层结构。 2 6 和多潜能细胞转录因子Nanog、oct4、SoX2的水平普遍高于人羊膜间充质基质 细胞，但是人羊膜上皮细胞与人羊膜间充质基质细胞二者表达间充质干细胞标记 物CD73、CDl05的水平无明显差异。 3 人羊膜上皮近表层细胞表达胚胎干细胞标记物SSEA3、SSEA4、TRAl—60、 上皮近基底层细胞，尤其表达SSEA4最强最显著的细胞在形态上主要为较小的 近圆形细胞而在位置分布上主要位于羊膜上皮近基底层处；人羊膜上皮近表层细 胞与人羊膜上皮近基底层细胞二者表达问充质干细胞标记物CD73水平未见差 异；但是人羊膜上皮近表层细胞表达SSEAl和CKl9的水平明显高于人羊膜上 皮近基底层细胞。 4 经胰酶反复多次消化去上皮后的羊膜组织，其上皮面仍有细胞存留，这些细 胞具有上皮属性，并且比人羊膜全层未消时的上皮细胞更加强烈的表达胚胎干细 胞标记物SSEA3、SSEA4、TRAl．60、TRAl．8l。 实验结论 1 人羊膜上皮层不是均一的单层上皮，人羊膜上皮内存在多层上皮细胞紧密排 列而成的非单层结构。 2 人羊膜上皮细胞比人羊膜间充质基质细胞具有更接近胚胎干细胞的性质。 3 人羊膜上皮层内尤其是上皮复层区域内的上皮细胞具有异质性，人羊膜上皮 近基底层细胞比人羊膜上皮近表层细胞具有更强的类胚胎干细胞性质，这种异质 性和干性差异可能源于人羊膜上皮中含有处于不同分化发育阶段的上皮细胞。胚 胎干细胞标记物SSEA4可作为一种重要有效的标志物来筛选最具类胚胎干细胞 性质的人羊膜上皮细胞。 4 在人羊膜全层中，上皮近基底层细胞的类胚胎干细胞性质及分化潜能最强； 人羊膜上皮层内具有最大分化潜能的类胚胎于细胞更大程度上存在于人羊膜上 皮层基底部与人羊膜间充质层交界处，人羊膜上皮近基底部可能是人羊膜上皮干 细胞甚至是人羊膜来源干细胞最直接和最重要关键的储备区。 关键词 人羊膜上皮细胞，人羊膜间充质基质细胞，近基底层羊膜上皮细胞，近表层 羊膜上皮细胞 7 ABSTRACT Background necrosisinduced heandiseasesareoneoft11e MyocardiaI￡I锄age卸d bym锄y arc