人巨细胞病毒UL145及UL13基因转录特点及转录本结构研究.pdfVIP

·中文论著摘要· 人巨细胞病毒ULl45及ULl3基因 转录特点和转录本结构研究 前言 人巨细胞病毒(Human 畸形和疾病，如黄疸性肝炎、胆道闭锁、先天性巨结肠、小头畸形、智力低下、 耳聋等多器官、多系统病变。也可引起免疫低下患者(如艾滋病患者和器官移植 患者)的致死性感染，危害巨大。根据HCMV先天感染致畸率和我国每年出生人 数推测，我国每年因HCMV先天感染所致伤残儿约4万名，给社会和家庭带来巨 大负担。HCMV已成为感染所致先天畸形和出生缺陷的首要因素。 目前，HCMV感染的致病机理尚不清楚。近年来，大多数学者认为病毒的自 身结构，特别是与病毒的毒力、组织细胞嗜性和与病毒逃避机体免疫能力密切相 关的病毒基因差异，可能是决定HCMV先天感染致病机制的内在因素。 株的临床株进行了核酸序列比较，发现临床低传代的Toledo株大约有15kb的片 段(预测编码19个开放阅读框openframe,ORF)在高传代的实验室株 reading ADl69株中不存在，这些新序列定位于长独特序列UL与反向重复序列b’(IRL) ULl33、ULl34、…ULl51。作 的交界区，定义为UL／b’区，分别命名为HCMV 者推测，此19个基因可能在病毒的复制、潜伏和对宿主的致病性方面起重要作用； 其中一些基因具有编码糖蛋白的能力，推测可能在体内病毒对细胞表面病毒受体 的吸附方面起重要作用，决定病毒的组织细胞嗜性。有学者根据小鼠动物模型研 究发现Toledo株比ADl69株复制水平至少高2．3个数量级，认为可能是由于 ADl69株在细胞培养反复传代过程中出现UL／b’区遗传信息的丢失，导致其毒力 和致病性明显减弱。由此可以看出UL厂b’区的这19个新基因及其编码蛋白在 HCMV感染的致病性方面很可能起到重要作用。 已有学者进行了有关HCMVUL／b’区基因多态性及蛋白功能的研究，如 3个基因型，其编码的蛋白与肿瘤坏死因子受体具有同源性，其在单纯疱疹病毒 virus，HSV)进入细胞的介质；ULl46 中的同源基因是单纯疱疹病毒(herpessimplex 和ULl47的基因呈高度多态，其编码的蛋白是趋化因子的类似物。有研究表明， ULl46编码的蛋白是中性粒细胞的诱导剂，作为趋化因子具有诱导钙动员、中性 粒细胞脱颗粒的作用。 ．HCMV ULl45基因是UL／b’区的的19个基因之一，其位于高度多态性基因 ULl44和ULl46之间。2007年有学者对HCMVULl45基因在先天感染患儿临床 株中的基因多态性进行研究。与相邻基因不同的是，HCMVULl45基因在临床株 中高度保守，这种高度保守性提示其可能在病毒感染中具有重要作用。但目前尚 缺少对ULl45基因转录特点和mRNA结构的研究。HCMV基因组的转录过程具 有非常复杂的机制，获得HCMV基因的转录本结构是揭示其致病机理的前提条 ULl45基因转录特点和转 件，所以有必要运用分子生物学实验手段获得HCMV 录本结构。 在病毒的有效感染期，HCMV基因以一种级联形式进行表达，分别定义为即 刻早期(immediate 基因在病毒其它基因表达和病毒复制中起着关键作用；E期基因编码蛋白主要参 与DNA复制；L期基因编码病毒的结构蛋白。ULl3基因位于HCMV基因组的 达。Dunn证实ULl3基因对于HCMV在成纤维细胞中的复制可有可无。通过对 Genebank中检索到的HCMVULl3序列进行基因多态性分析，发现该基因在临床 分离株中高度保守。然而，截至目前尚缺乏有关ULl3基因的转录特点和转录本 结构的研究。 本研究利用eDNA文库筛选，Northern blot和eDNA末端快速扩增(rapid ofeDNAends。RACE)实验方法，研究了HCMVULl45基因及ULl3 amplification 基因在临床分离株中的转录特点，并获得了这两个基因转录本的具体结构，为进 一步分析其