人巨细胞病毒UL128基因编码蛋白的生物学功能探究.pdfVIP

一、摘要 中文 英文 二、英文 三、论文 前言 材料 结果 讨论 结论 四、本研究创新性的自我评价………………………………………………………37 五、参考文献…………………………………………………………………………38 六、附录 综述………………………………………………………………………………………………………一39 在学期间科研成绩………………………………………………………………47 致{射………………………………………………………………………………………………………．．48 个人简介…………………………………………………………………………49 ·中文论著摘要· 酵母双杂交筛选与人巨细胞病毒ULl28两种不同结构 相互作用蛋白 目 的 人巨细胞病毒(Human 在人群中感染率为50％．80％。正常人感染HCMV后表现为无症状的隐性或潜伏 感染。而一旦人体的免疫机能发生重大变化时(如妊娠、肿瘤、HIV感染、器官 移植和新生儿等)，HCMV即从潜伏感染活化为继发性的增殖感染，引起严重的 临床症状甚至致死。同时HCMV感染还可引起间质性肺炎、肝炎、脑炎、视网膜、 肾、神经系统、肠胃系统的疾病。随着免疫低下人群患者的增多，HCIVIV感染及 其引发的严重疾病(致盲、致死)日益受到关注。 HCMV广泛的致病性是由其病毒感染多种类型细胞的能力决定的。在免疫功 能低下人群中HCMV感染的首要目标为内皮细胞和上皮细胞。研究证明HCMV ULl31A．128编码蛋白是病毒在内皮细胞中的复制及白细胞的播散过程中的重要 决定因子。而我们在研究中发现ULl28 flame)具有两个大 ORF(openingreading ULl28-519bp和 小不同的片段，分别为519bp和642bp，我们将其命名为HCMV HCMV ULl28．642bp，为了观察两个ORF片段所编码蛋白的功能是否相同及其是 否在HCMVULl31A．128编码蛋白感染内皮及上皮细胞过程中发挥着各自不同的 作用，故而利用酵母双杂交系统从人胎脑cDNA文库中筛选与HCMV ULl28．519bp和HCMVULl28．642bp编码蛋白相互作用的蛋白，这将为研究 HCMV ULl28基因在内皮细胞感染嗜性中所发挥的作用及揭示HCMV先天感染 致病机理、解决人巨细胞病毒先天感染的防治、减少先天畸形儿出生等医学问题 奠定基础。 实验材料与方法 一、实验材料 标本为中国医科大学附属盛京医院病毒室保存的临床低传代分离株H；酵 fetusbrain librar由武汉大学生命科学学院 表达质粒pGBKT7及pACT2一Human 毒学国家重点实验室肖庚富教授惠赠：构建表达载体的相关试剂(Takara公司)； Elmer 司)；常用实验设备如BECKMAN台式低温高速离心机、PerkinPCR循环 仪、电穿孔仪(BioRad)、全温振荡培养箱等；常用数据库及分析软件如基因组 数据库、蛋白质分析数据库、凝胶成像及扫描分析软件、引物设计软件等。 二、实验方法 (一)HCMV ULl28两种基因片段的构建及鉴定 技术将HCMV 为模板，从而扩增出ULl28基因的两个不同大小的片段。 2、将ULl28基因的两种片段分别切胶纯化后与载体pGBKT7同时进行双酶 pGBKT7．ULl28．642bp)，测序并分析。 (二)酵母双杂交筛选 1、检测重组质粒对酵母的毒性和自激活活性； 2、采用醋酸锂法将酵母双杂交系统中的重组诱饵载体一重组质粒 养至菌落长出，以X—gal筛选蓝色的阳性克隆。 3、回转杂交鉴定：玻璃珠法提