人肝星状细胞系的建立和其生物学特性研究.pdfVIP

摘要 摘 要 背景和目的肝细胞性肝癌(Hepatocellularcarcinoma，HCC)是世界上最常见的五 大恶性肿瘤之一，每年约有500，000新发病例；尤其是在亚洲，因为乙型肝炎病 BvinJjs，HBv)的感染率高，一些国家HCC发病率非常高，而西方一 毒(hepatitis 些国家由于丙型肝炎患者增多，HCC发病率也逐年升高。我国是HCC的高发国 家，发病率居世界首位，死亡率位于恶性肿瘤死亡率的第二位。肝星状细胞 stellate (HepaticCell，HSC)是肝癌微环境中的主要基质细胞，研究表明，它在 促进肝癌的发生、发展方面发挥着重要作用。然而，现有的性状稳定的肝星状细 胞系的种类仍然比较有限而且不易获得，而且临床手术标本来源有限，限制了研 究的进一步开展。本实验的研究目是通过建立生物学性状稳定的人肝星状细胞 系，以克服这一障碍，为后续实验研究提供可靠的细胞来源。 实验方法我们首先运用胶原酶消化及percoll密度梯度离心的方法获得纯度高 的人肝星状细胞，并对其进行初步鉴定，然后通过慢病毒感染的方法，将人端粒 酶基因hTERT导入原代肝星状细胞，用G418进行药物筛选，构建新的人肝星 状细胞系(hⅡ!RT-hHSC)。我们通过RealtimePCR和免疫蛋白印迹等方法检测 hTERT．hHSC的生物学特征。运用增殖实验、划痕实验及侵袭实验分别检测 hTERT_hHSC是否能具有促进肿瘤细胞增殖、迁移和侵袭等肝星状细胞的特性。 结果我们成功分离纯度高的人肝星状细胞。慢病毒感染将hTEI盯基因成功导入 MMP．14、 基本与P血na巧．hHSC相同，除MMP．2、TIMP．2、PDGF．B表达量 的肝星状细胞。hTERT-hHSC促进HepG2细胞增殖、迁移及侵袭。 结论我们通过密度梯度离心的方法成功分离纯化人肝星状细胞，通过慢病毒感 染的方法，成功建立生物学性状稳定的人肝星状细胞系hTERT-hHSC。 关键词：肝癌， 肝星状细胞，端粒酶 Abst瞰 Abstract andaims acoIlllTlonworld诵de Bacl【gro蛐d H印atocellularcarcinoma(HCC)is f01lowed mali印a11cy．HoweVer，Comprel】e11sive触a恤entisbyp00rpr0印osis． stellatecells rolesin Acc啪ulatingreponssuggeSted也athepatic mSCs)critical be fortlle carCillomaf0肌ationand should hepatocellular progression，andresponsible occurrence锄d of used carcinoma(HCC)．Here，we deVelopmenthepa幻cellular h啪aIltelomerasereverSe toestablishanewh啪m t船IlscriptaSe(hTE啪iIlduction t0 the stellatecell order0Verc锄eiIlsu伍cie