人脐血间充质干细胞移植汉疗肝硬化大鼠的实验探究.pdfVIP

咖唧吣吣咖籼燮啦珊墼 Y2148906 摘 要 目的： 通过建立肝硬化的动物模型，并制备人脐血来源的间充质干细 stemcells MSCs)，研究脐血MSCs移植对肝硬化大 胞(mesenChmal 鼠的治疗作用，探讨移植的脐血MSCs能否在肝硬化大鼠的肝内定 植、分化，表达人肝细胞标志物基因。 方法： 1．复合因素法(40％CCL4油剂皮下注射+20％酒精饮用水+高脂饮食) 诱导大鼠的肝硬化模型，砸及Masson染色检测建模是否成功。 2．无菌条件下采集新生儿脐带血，密度梯度离心法分离获得人脐血 单个核细胞，通过培养、纯化、传代扩增得到脐血MSCs，流式 Brdu)在体外对细胞进 溴．2-脱氧尿嘧啶(5-bromo-2deoXyuridine 行标记，免疫荧光法检测标记是否成功。 3．将建模成功的肝硬化大鼠随机分为：A组，门静脉移植实验组 (n一20)：经门静脉移植脐血MSCs1m1；B组，门静脉移植对照 组(n一20)：经门静脉注射等体积的PBS。正常大鼠也随机分为2 组：C组，门静脉移植正常组(n-10)：经门静脉移植脐血MSCs 1ml；D组，正常对照组(n-10)：普食普水喂养。移植四周后处 死各组大鼠，下腔静脉采血进行肝功能及免疫相关指标检测；髓 及Masson染色了解各组大鼠脐血MSCs移植后的组织病理改变； 免疫组织化学技术、免疫荧光法检测经Brdu标记的脐血MSCs 的定植情况；RT-PCR技术检测肝硬化大鼠的肝组织是否有人源性 肝细胞标志物基因的表达。 结果： 1．复合因素法建模8周可成功诱导大鼠肝硬化模型，脏染色示： 大鼠的正常肝小叶结构破坏，被假小叶所取代，假小叶内肝细胞 有不同程度变性和坏死，可见炎性细胞浸润。Masson染色：模型 组大鼠可见清晰典型假小叶结构，胶原纤维呈蓝色。 2．成功分离培养出人脐血MSCs，可见P3代细胞形态呈相对均一的 长梭行，平行排列或旋涡状生长，流式细胞仪检测提示其细胞表 检测示，Brdu在体外可成功标记脐血MSCs。 3．脐血MSCs经门静脉移植4周后，A组大鼠的一般情况好转，体 重较移植前及B组相比明显上升(PO．05)；肝功能与B组相比， 组与B组相比，肝细胞坏死、脂肪变以及肝纤维化等病变程度均 有改善，经半定量分级评分显示差异有显著性(PO．05)。 4．脐血MSCs移植四周后，取A组大鼠肝组织进行免疫组织化学检 查，可见经Brdu标记的阳性细胞，细胞核呈棕黄色在肝内定植； 免疫荧光检测见Brdu标记的阳性细胞，细胞核发红色荧光在肝内 8m砒怆、 定植；RT-PCR检测发现A组大鼠肝组织有人源性CKl II ALB m砌妊的表达。 5．脐血MSCs移植4周后，C组与D组相比，大鼠体重变化无显著 差异(PO．05)；C组大鼠肝组织、脾脏组织、肺组织、肾组织均 有少量Brdu标记的阳性细胞定植，但各器官病理检测未发现瘤样 生长，无病理改变。 结论： 1．人脐血MSCs移植能在一定程度上改善肝硬化大鼠的肝功能及肝 脏的组织学结构。 2．经门静脉移植的人脐血MSCs可在肝硬化大鼠肝内归巢定植并向 肝样细胞分化。 关键词： 肝硬化； 脐血间充质干细胞； 移植； 大鼠 ⅡI ABSTRACT objective： of1iver