人脐血间充质干细胞移植治疗DCM大鼠的实验探究.pdfVIP

『IIIJJIlllIJIIl／／lllll／lllllJJIIIl／llllllll Y21 47330 摘要 目的： 应用腹腔注射阿霉素建立扩张型心肌病(dilated cardiomyopathy, umbilical DCM)Wistar大鼠模型…，培养扩增人脐血间充质干细胞(human cord blood stem mesenchymal stem cytometry，FCM)鉴定为间充质干细胞(mesenchymalcells，MSC)后， natriuretic peptide，BNP)的影响，免疫荧光及免疫组化染色检测大鼠心 肌组织中HUCB-MSCs的心肌肌钙蛋白T(CardiacTroponinT，cTnT)的 表达，以探讨HUCB．MSCs移植后改善DCM大鼠心功能的作用机制。 方法： 实验组(n=90)。实验组参照文献建立DCM模型，并将成功建模的46 HUCB．MSCs治疗组(简称治疗组，n=23o在无菌条件下取健康产妇分 娩胎儿时的脐带血，利用密度梯度法分离脐血单个核细胞(mononuclear HUCB—MSCs。取P3代细胞分别通过流式细胞仪(flow cytometry，FCM) T 应用台盼蓝染色计数HUCB．MSCs数量并计算活细胞率；然后应用5． 检测Brdu标记率，先后两次(间隔2周)经尾静脉注射到治疗组大鼠体内。 4周后对各组大鼠进行病理检查计算病理积分：超声心动图评价LVEF， confocal scanning 达cTnT的情况。 结果： 1．所获取的HUCB．MSCs的鉴定及标记结果：应用贴壁法培养获取的 浓度lOlxmol／L的Brdu标记72h后的标记率为87％。 2．治疗后正常组、对照组和治疗组大鼠心肌病理积分、LVEF和血浆BNP 的变化：①治疗组治疗4周后心肌病理积分(O．824-0．37)与治疗前 差异有统计学意义(尸O．05)；③治疗组治疗4周后BNP为 (364．22+30．27)，与治疗前(513．35+27．33)以及对照组 II 但仍高于正常组(76．03+5．27)，其差异有统计学意义(尸O．05)。 3．免疫组化染色及激光共聚焦细胞仪检测治疗组HUCB．MSCs在心肌 中的定植及分化的结果：①免疫组化染色可见治疗组大鼠心肌中Brdu 标记的HUCB．MSCs散在分布，细胞核为棕黄色，胞质中可见棕黄色 肌原纤维结构；②激光共聚焦细胞仪观察治疗组心肌组织 在分布呈(红色)，其表达的cTnT呈、(绿色)，细胞核为蓝色。 结论： 1、人脐血经密度梯度离心后应用贴壁法培养可获得足量可靠的 HUCB．MSCs，其表达的表面抗原符合MSCs的特征。 高LVEF，降低血浆BNP，有明显改善DCM大鼠心功能的作用。 心肌细胞特异性蛋白cTnT，提示可能分化为“心肌样”细胞。 改善的机制之一。 关键词：脐带血间充质干细胞，细胞培养，心功能，扩张型心肌病，心 肌肌钙蛋白T，血浆脑钠肽 III ABSTRACT objective：