人脐带间充质干细胞移植对实验性大鼠脑出血作用探究.pdfVIP

中文摘要 人脐带问充质千细胞移植对实验性大鼠脑出血作用研究 摘 要 umbilicalcord 目的：将人脐带间充质干细胞(human mesenchymal stem 损伤脑组织中的存活、迁徙和神经分化情况，探讨hUMSCs移植对大鼠 脑出血后神经功能恢复的影响及其作用机制，为hUMSCs在神经科学领 域的临床应用提供理论依据及实验基础。 方法：无菌条件下收集足月妊娠剖宫产新生儿脐带，D．Hank’S洗去血 管内的残存血，剔除脐带动静脉，将剩余的组织剪碎至1mm3大小的组织 bovine 块，O．2％胶原酶II消化，在含有20％胎牛血清(fetalserum，FBS)、 25 2 mM左旋 ng／ml表皮细胞生长因子(epidermalgrowthfactor,EGF)、 00 00 U／ml青霉素，1 谷氨酰胺(L．glutamine，L．Glu)、1 p．g／ml链霉素的 DMEM／F12培养基进行原代培养。观察原代培养细胞的形态学变化，当 mM 细胞达到融合状态时，加入0．25％胰酶．1 EDTA消化细胞，并传代。 lb， 收集消化后的细胞，以流式细胞法行细胞表型检测，包括PE．CDl PE．CD45，PE—CD73，PE—CD90，PE-CD1 对照。 选取体重在270-300 根据包新民《大鼠脑立体定位图谱》定位，用直径lmm的牙科钻头在大 鼠右侧颅骨(AP一0．5mm；ML=3．0mm)钻孔，将微量注射器固定在立 体定向架上，取胶原酶VII水溶液2u1，以前囟为参照点缓慢注射到右侧 尾状核头部(AP一0．5mm；ML=3．0 mm；DV=5．5mm)，建立大鼠脑出血模型 (intracerebral h，采用改良 hemorrhage，ICH)。脑出血模型建立成功后24 神经功能缺失评分(modified score，mNSS)对实验动 severity neurological 物进行神经行为学评价，选取评分在7．12分间(中度损伤)大鼠纳入实 Buffered 将大鼠再次麻醉，头部固定于立体定向架上。用10“L的Hamilton 中文摘要 注射器，将1，1．双十八烷．3，3，3’，3．四甲基吲哚羰花青．高氯酸盐 mmML=3．0mmDV=3．5 mm)。每只大鼠接受10此注射，共2×105细胞。 拔针后用医用生物蛋白胶将注射针孔及骨孔封闭。PBS对照组依同样方法 注入等量的PBS替代hUMSCs。 细胞移植后1、7、14、21、28、35d对所有大鼠进行mNSS评分； 将大鼠处死迅速断头取出全脑连续冰冻切片，免疫荧光染色检测DiI标记 hUMSCs在出血脑组织中存活、迁徙以及成熟神经元标志．微管相关蛋白2 2，MAP2)、神经胶质细胞标志．胶质纤维酸 (m