雪旺细胞移植改善急性心肌梗死后神经重构地研究%26年龄对心脏瓣膜种子细胞体外培养增殖地影响.pdfVIP

第一部分 雪旺细胞移植改善急性心肌梗死后神经重构的研究 摘要： 背景：所谓神经重构指的是心肌梗死边缘区交感神经的过度增殖和交感神经纤维的 不均衡分布。既往研究表明，神经重构是造成急性心肌梗死后心律失常的重要原因， 而后者则是造成急性心肌梗死后死亡的重要原因。但是目前控制急性心肌梗死后心 脏神经重构的手段仍十分有限。雪旺细胞具备强大的神经再生功能，多数研究表明， 雪旺细胞可以通过旁分泌和细胞接触机制诱导神经轴突再生，并参与神经鞘基质蛋 白的合成，对新生神经轴突给与必要的支撑。因此，本研究拟探讨雪旺细胞在促进 心脏神经再生和改善心脏神经重构方面的作用。 方法：在lewis大鼠上成功建立急性心肌梗死模型后，将心肌梗死鼠随机分为细胞 养后，经爬片S100染色鉴定雪旺细胞表面标记物，经ELISA方法鉴定雪旺细胞在 离体环境下释放神经生长因子和血管内皮生长因子的能力。取2代雪旺细胞5×106， 注射到心肌梗死周边区。在注入雪旺细胞24小时、l周和2周时间点分别取材，进 行组织标本的免疫组化、免疫荧光以及蛋白印记试验。其中，免疫组化指标选择 S100、BrdU和CD68，免疫荧光的指标选择酪胺酸羟化酶、乙酰胆碱酯酶和生长相 关蛋白43；蛋白印记实验指标选择神经生长因子，血管内皮生长因子，生长相关蛋 白43，连接蛋白43和层粘连蛋白。 结果：在不同时间点，比较雪旺细胞移植组和对照组S100染色阳性细胞数。在对 照组，急性心肌梗死二十四小时后，S100染色阳性细胞急剧减少；在雪旺细胞移植 组，急性心肌梗死二十四小时后，可见多量S100和BrdU同时染色阳性的细胞。随 着时间推移，两组S100染色阳性的细胞均增多，但雪旺细胞移植组S100染色阳性 细胞显著多于对照组(p0．05)，但是BrdU染色阳性细胞随着时间的推移急剧减 少。这提示，急性心肌梗死后，随着时间的推移，心肌内自身雪旺细胞不断再生， 而移植的雪旺细胞不断死亡。在心肌梗死后24小时，与对照组相比，在雪旺细胞 移植组，神经生长因子、血管内皮生长因子、生长相关蛋白43、连接蛋白43以及 层粘连蛋白在心肌内表达无显著差异，而在心肌梗死后一周和两周时，雪旺细胞移 植组上述蛋白表达均明显增高。在24小时，植入心肌梗死周边区的雪旺细胞对巨 2 噬细胞起到了明显的趋化作用。但心肌梗死后一周和两周时，两组雪旺细胞计数无 差别。在心肌梗死后24小时、一周和两周时，两组心肌梗死周边区交感神经、副 交感神经和新生神经纤维密度均有所增高，但在雪旺细胞移植组，心肌梗死后两周 时副交感密度与交感密度比值显著高于对照组。但雪旺细胞移植未能改善心功能。 结论：在急性心肌梗死后，心肌梗死周边区植入的雪旺细胞可以释放NGF，吸引巨 噬细胞，刺激层粘连蛋白表达，从而提高副交感密度与交感密度比值，进而改善急 性心肌梗死后神经重构的发生。雪旺细胞移植有望提供一种全新的细胞治疗手段， 具备良好的临床应用前景。 关键词：心肌梗死，细胞移植，神经重构 3 SchwannCells ModifiesNeural afterAcute Transplantation Remodeling for cell-based Myocardial novel Infarction：Implicationtherapy Abstract： remodelrefers anduneven Background：Neural to ing hyperinnervation distributionof nervefibersaroundtheborderofinfarcted sympathetic neural couldcausefatalventricular myocardium．Unbalanced